背景及目的：目前,糖尿病肾病(diabetic nephropathy, DN; diabetic kidney disease, DKD)是引起终末期肾病(end stage renal disease, ESRD)的最常见病因,是糖尿病(diabetes mellitus, DM)最严重的慢性微血管并发症之一,严重威胁着人类的健康。因此探寻DN的发病机制、寻找其早期防治药物有非常重要的临床意义和社会价值,其发生发展机制及其防治措施已成为当前的研究热点。DN发生发展机制十分复杂,至今仍未能完全阐明,近十余年来通过不断深入的研究,发现DN是遗传因素、肾血流动力学改变、非酶糖基化、多元醇通路激活、氧化应激、血管活性物质及细胞因子激活、蛋白激酶C激活、肾病蛋白等多种因素综合作用的结果。研究证实,乌司他丁(Ulilnastatin, UTI)具有改善微循环、抗氧化、抗微炎症、保护肝肾等重要脏器的作用,在危重患者的脏器保护方面已得到较好的临床应用,近年来研究发现UTI对腹膜纤维化等慢性疾病亦有治疗功效,但UTI对DKD是否具有保护作用尚未证实。为此,本研究建立糖尿病大鼠模型,观察UTI对糖尿病肾病的作用,并从抗氧化应激、抗纤维化及肾小球硬化等方面探讨UTI减轻糖尿病大鼠肾损害、保护肾功能的相关作用机制。方法：1.模型的建立及实验分组：Wistar大鼠(健康SPF级,雄性)30只,均适应性喂养1周,禁食12h后,将溶于0.1mmol/L、pH4.5枸橼酸缓冲液的链脲佐菌素(STZ)单次腹腔内注射(60mg/kg),每日定时检测其空腹血糖、尿糖等指标。造模成功指标：连续3d空腹血糖>16.7mmol/L+尿糖阳性。选取20只糖尿病大鼠随机分为糖尿病组(B组)及UTI组(C组),每组10只,同时设同批次10只正常大鼠为空白对照组(A组)。C组：每日腹腔内注射UTI40000IU/kg,A组及B组：每日腹腔内注射等量生理盐水,共12周。3组大鼠在12周实验期间内均给予标准饮食,不使用胰岛素等降糖药物。2.标本收集：3组大鼠均分为两批次于第8周及第12周处理,取各组大鼠的尿液及血液并保存,制备肾组织匀浆及组织切片并保存备用。3.检测指标：以葡萄糖氧化酶法检测大鼠空腹血糖(FBG)。血、尿肌酐采用BeckmanCX-5全自动生化仪进行检测,并依据公式计算肌酐清除率：Ccr(ml/min)=尿肌酐／血肌酐／24h(1440min)×24h尿量(m1),并以体质量校正。采用考马斯亮兰法测定大鼠24h尿蛋白量及肾匀浆蛋白量。按试剂盒说明书检测血清及肾匀浆中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、结缔组织生长因子(CTGF)、基质金属蛋白酶(MMP-9)、纤溶酶原激活物抑制因子-1(PAI-1)含量,肾匀浆中MDA、SOD、含量用肾组织蛋白浓度校正。制备肾组织切片行HE染色；CTGF、MMP-9及PAI-1免疫组化检测。结果：1.在第8周末及第12周末时,糖尿病组及UTI组大鼠空腹血糖均高于空白对照组(P均<0.05),糖尿病组与UTI组大鼠空腹血糖的差异无统计学差异(P>0.05)。糖尿病组及UTI组大鼠的24h尿蛋白及血肌酐均高于空白对照组(P均<0.05),UTI组大鼠24h尿蛋白及血肌酐水平均低于糖尿病组(P均<0.05)。糖尿病组及UTI组大鼠的肌酐清除率均低于空白对照组(P均<0.05),UTI组大鼠肌酐清除率高于糖尿病组(P均<0.05)。2.在第8周末及第12周末,各组大鼠血清及肾组织匀浆的MDA、SOD的差异均具有统计学意义(P均<0.05)。糖尿病组大鼠MDA含量高于空白对照组(P<0.05),SOD低于对照组(P均<0.05)。给予UTI可显著的降低糖尿病大鼠MDA活性、升高SOD的活性(P<0.05)。3.在第8周末及第12周末,糖尿病组大鼠血清及肾匀浆CTGF含量均高于空白对照组(P<0.05),给予UTI可显著降低糖尿病大鼠血清及肾匀浆CTGF的含量(P<0.05),但其含量仍高于空白对照组大鼠(P<0.05)。4.在第8、12周末时,3组大鼠之间血清及肾匀浆MMP-9、PAI-1的差异均具有统计学意义(P均<0.05)。糖尿病组大鼠MMP-9含量低于空白对照组、PAI-1含量高于空白对照组(P<0.05)。给予UTI可显著升高糖尿病大鼠MMP-9含量、降低PAI-1含量(P均<0.05)。5.光镜下空白对照组大鼠肾组织正常,糖尿病组大鼠肾小球体积增大,系膜增厚,肾小管肿胀,UTI组肾组织病变程度较糖尿病组显著减轻。6. CTGF免疫组化染色：空白对照组肾组织着色浅淡稀疏,糖尿病组肾组织着色广泛、浓集,UTI干预组与糖尿病组相比,着色范围相似,但程度明显减轻。7.MMP-9在正常对照组大鼠肾小球着色明显,糖尿病组着色明显减轻,UTI干预组表达上调。PAI-1在正常对照组肾小球及肾小管表达不明显,而糖尿病组表达明显增多,UTI干预组表达减少。结论：1.UTI可显著降低糖尿病大鼠的血肌酐、提高肌酐清除率、减少24h尿蛋白,说明UTI对糖尿病大鼠的肾功能具有保护作用。2.UTI可以抑制DN大鼠肾脏组织的氧化应激,减轻糖尿病大鼠的肾脏损害。3.UTI可降低糖尿病大鼠CTGF含量,从而减轻肾脏纤维化,延缓糖尿病肾病的发生发展。4.UTI可以降低糖尿病大鼠PAI-1含量、升高其MMP-9含量,进而减少肾脏ECM沉积,抑制糖尿病肾脏病变进展。