目的：用分子生物学方法分析大肠癌病人循环肿瘤细胞(CTC)中肿瘤干细胞(CSC)标志ALDH1、EpCAM的表达及增殖标志Ki67的表达，为大肠癌微转移的早期诊断和准确分期提供有价值的信息。　　 方法：使用RT-PCR的方法从培养的细胞（SW620和Sup-B15细胞株）中获取EpCAM、ALDH1及Ki67基因目的片段，将目的片段分别插入pGEM-T载体，构建三个质粒pGEM-T-EpCAM、pGEM-T-ALDH1和pGEM-T-Ki67作为荧光定量PCR检测的阳性标准模板；将克隆的阳性标准模板分别按108、107、106、105、104、103copies/μl梯度稀释，制作荧光定量PCR的标准曲线。　　 收集56例经病理确诊的结直肠癌病人术前外周静脉血7ml，56例健康志愿者做阴性对照组，从全血中提取单个核细胞的总RNA。规定取400ng总RNA加入20μl反转录体系反转录成cDNA，之后用荧光定量PCR Taqman探针法检测各个样本中三个目的基因EpCAM、ALDH1、Ki67mRNA的表达。　　 结果：1）大肠癌病人组EpCAM、ALDH1、Ki67mRNA表达显著高于对照组(P＜0.005);2)ALDH1水平与肿瘤浸润程度及淋巴结转移相关，EpCAM水平与TNM分期及远处转移相关。　　 结论：分子生物学方法检测大肠癌病人CTC中EpCAM、ALDH1、Ki67mRNA的表达：1）有可能成为一种简便可行的早期检测大肠癌微转移的方法；2）为结直肠癌病人的准确分期、预后判断及制定合理的治疗方案提供有价值的信息。