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目的：探讨外周血炎症因子及肺组织MHCII基因在脂多糖(LPS)致急性呼吸窘迫综合征(ARDS)模型小鼠体内的表达量改变，通过研究炎症反应通路探讨慢病毒转染沉默肺组织MHCII基因对内皮祖细胞移植(EPCs)治疗ARDS的作用，为治疗ARDS提供新思路。
方法：选78只昆明白雄性小鼠，随机分为4组，①正常对照组(NC组)②脓毒症模型组(LPS组)③内皮祖细胞移植组(LPS+EPCs组)④MHCII慢病毒干扰组(LPS+MHCII-+EPCs组)。ARDS模型建立：以12mg/kg向②③④组小鼠尾静脉注射LPS，建立脓毒模型；1小时后向③组小鼠尾静脉注射200ulEPCs；向④组小鼠尾静脉注射MHCII慢病毒100ul，观察1小时后，再向④组小鼠尾静脉注射200ulEPCs。模型建立第三天(d3)，③与④组，用10%苯巴比妥浅麻醉后活体成像仪上荧光示踪；d3及d7各组小鼠麻醉解剖，留取肺组织行HE染色及快速冰冻切片，观察各组显微镜下病理改变及荧光定位情况；外周血酶联免疫吸附试验法(Elisa)方法检测炎性因子TLR-4、NF-KB、IL-12、TNF-a的表达量；荧光定量PCR(RT-PCR)检测TLR-4以及MHCIImRNA表达情况；蛋白免疫印迹法(Western blot)方法检测MHCII蛋白的表达情况。多组间数据分析采用方差分析，Pearson法分析相关性。
结果：1、组织病理结果：NC组肺组织结构正常，LPS组肺泡及间质结构紊乱无序，炎性浸润及纤维素样渗出，肺泡及毛细血管腔出血狭窄，呈现大面积水肿及炎症细胞浸润损伤；LPS+EPCs组较LPS组损伤减轻；LPS+MHCII-+EPCs组炎性细胞浸润减少，肺泡及间质结构基本完整。2、EPCs及MHCII慢病毒示踪结果：LPS+EPCs组与LPS+MHCII-+EPCs组组肺组织快速冰冻切片均可见标记EPCs及MHCII慢病毒的绿色荧光表达，活体显像也可见标记EPCs及MHCII慢病毒的荧光主要在胸部表达。3、Elisa法检测炎性因子TLR-4、NF-KB、IL-12、TNF-a表达，在NC组、LPS组、LPS+EPCs组、LPS+MHCII-+EPCs组表达量d3分别为(1.56±0.111、38.0±11.0、0.244±0.0794、24.9±4.05)pg/mL，(2.98±0.187、273±27.6、5.36±0.658、107±18.1)pg/mL，(2.54±0.182、125±27.3、2.23±0.763、71.4±8.13)pg/mL，(1.81±0.201、59.0±15.6、0.531±0.150、44.1±4.81)pg/mL。d7分别为(1.54±0.129、2.90±0.194、2.33±0.159、1.63±0.166)pg/mL，(36.7±11.7、233±28.9、111±42.0、44.1±13.9)pg/mL，(0.292±0.0510、2.94±0.696、1.57±0.439、0.356±0.0783)pg/mL，(24.0±4.33、85.0±15.6、63.6±11.6、32.7±5.23)pg/mL。LPS组较NC组均表现升高(均P＜0.0001)，而LPS+EPCs组及LPS+MHCII-+EPCs组较LPS组均表现降低(均P＜0.0001)，且LPS+MHCII-+EPCs组较LPS+EPCs组又表现明显降低(均P＜0.0001)，LPS+MHCII-+EPCs组较NC组无明显差异(P＞0.05)。d3与d7无明显差异(P＞0.05)。4、RT-PCR检测TLR-4、MHCIImRNA表达，在NC组、LPS组、LPS+EPCs组、LPS+MHCII-+EPCs组d3分别(89.1±55.6、0.303±0.0821)，(2222±924、5.62±0.819)，(743±351、2.98±0.773)，(174±91.2、0.526±0.0745)。d7分别为(93.9±62.3、0.286±0.0639)，(1533±688、4.55±0.697)，(592±144、2.88±0.682)，(156±85.5、0.464±0.109)。LPS组较NC组表达量均表现升高(均P＜0.0001)，而LPS+EPCs组及LPS+MHCII-+EPCs组较LPS组表达量均表现降低(均P＜0.0001)，且LPS+MHCII-+EPCs组较LPS+EPCs组表达量又明显降低(均P＜0.0001)，LPS+MHCII-+EPCs组较NC组无明显差异(P＞0.05)。5、westernblot检测MHCII蛋白表达，NC组、LPS组、LPS+EPCs组、LPS+MHCII-+EPCs组，d3分别为(0.356±0.0669)，(1.49±0.310)，(0.924±0.200)，(0.544±0.0558)LPS组较NC组MHCII蛋白灰度值均升高(均P＜0.0001)，而LPS+EPCs组及LPS+MHCII-+EPCs组较LPS组MHCII蛋白灰度值均表现降低(均P＜0.0001)，且LPS+MHCII-+EPCs组较LPS+EPCs组MHCII蛋白灰度值又表现明显降低(均P＜0.0001)，LPS+MHCII-+EPCs组较NC组无明显差异(P＞0.05)。6、d3实验模型中LPS组MHCII与TLR4、NF-κB、TNF-a、IL-12均呈正相关(r2=0.824、0.867、0.763、0.830，且均p＜0.05)，同时TLR4在基因及蛋白水平呈强正相关(r2=0.991，且均p＜0.001)；LPS+EPCs组MHCII基因相对表达量与IL-12、MHCII蛋白、TLR4mRNA及其蛋白、NF-κB均呈正相关(r2=0.824、0.880、0.978、0.978、0.938，且均p＜0.05)，同时TLR4在基因及蛋白水平呈强正相关(r2=0.998，且p＜0.001)；LPS+MHCII-+EPCs组MHCII基因相对表达量与IL-12、MHCII蛋白、NF-κB、TNF-a、TLR4蛋白均呈正相关(r2=0.965、0.926、0.846、0.795、0.875，且均p＜0.05)，同时TLR4在基因及蛋白水平呈强正相关(r2=0.998，且p＜0.001)。
结论：1、脓毒所致ARDS时炎症因子TLR-4、NF-KB、IL-12、TNF-a明显增高；肺组织MHCII基因及蛋白表达明显增高，TLR-4基因及蛋白表达明显增高；MHCII与TLR-4、NF-KB、IL-12、TNF-a明显正相关。2、EPCs移植可以部分减少TLR-4、NF-KB、IL-12、TNF-a及MHCII的表达；MHCII与TLR-4、NF-KB、IL-12明显正相关。3、MHCII基因干扰后进行EPCs移植，可以明显抑制TLR-4、NF-KB、IL-12、TNF-a及MHCII的表达；且均较单独EPCs移植组明显下降；MHCII与TLR-4、NF-KB、IL-12、TNF-a依然表现为正相关。
方法：选78只昆明白雄性小鼠，随机分为4组，①正常对照组(NC组)②脓毒症模型组(LPS组)③内皮祖细胞移植组(LPS+EPCs组)④MHCII慢病毒干扰组(LPS+MHCII-+EPCs组)。ARDS模型建立：以12mg/kg向②③④组小鼠尾静脉注射LPS，建立脓毒模型；1小时后向③组小鼠尾静脉注射200ulEPCs；向④组小鼠尾静脉注射MHCII慢病毒100ul，观察1小时后，再向④组小鼠尾静脉注射200ulEPCs。模型建立第三天(d3)，③与④组，用10%苯巴比妥浅麻醉后活体成像仪上荧光示踪；d3及d7各组小鼠麻醉解剖，留取肺组织行HE染色及快速冰冻切片，观察各组显微镜下病理改变及荧光定位情况；外周血酶联免疫吸附试验法(Elisa)方法检测炎性因子TLR-4、NF-KB、IL-12、TNF-a的表达量；荧光定量PCR(RT-PCR)检测TLR-4以及MHCIImRNA表达情况；蛋白免疫印迹法(Western blot)方法检测MHCII蛋白的表达情况。多组间数据分析采用方差分析，Pearson法分析相关性。
结果：1、组织病理结果：NC组肺组织结构正常，LPS组肺泡及间质结构紊乱无序，炎性浸润及纤维素样渗出，肺泡及毛细血管腔出血狭窄，呈现大面积水肿及炎症细胞浸润损伤；LPS+EPCs组较LPS组损伤减轻；LPS+MHCII-+EPCs组炎性细胞浸润减少，肺泡及间质结构基本完整。2、EPCs及MHCII慢病毒示踪结果：LPS+EPCs组与LPS+MHCII-+EPCs组组肺组织快速冰冻切片均可见标记EPCs及MHCII慢病毒的绿色荧光表达，活体显像也可见标记EPCs及MHCII慢病毒的荧光主要在胸部表达。3、Elisa法检测炎性因子TLR-4、NF-KB、IL-12、TNF-a表达，在NC组、LPS组、LPS+EPCs组、LPS+MHCII-+EPCs组表达量d3分别为(1.56±0.111、38.0±11.0、0.244±0.0794、24.9±4.05)pg/mL，(2.98±0.187、273±27.6、5.36±0.658、107±18.1)pg/mL，(2.54±0.182、125±27.3、2.23±0.763、71.4±8.13)pg/mL，(1.81±0.201、59.0±15.6、0.531±0.150、44.1±4.81)pg/mL。d7分别为(1.54±0.129、2.90±0.194、2.33±0.159、1.63±0.166)pg/mL，(36.7±11.7、233±28.9、111±42.0、44.1±13.9)pg/mL，(0.292±0.0510、2.94±0.696、1.57±0.439、0.356±0.0783)pg/mL，(24.0±4.33、85.0±15.6、63.6±11.6、32.7±5.23)pg/mL。LPS组较NC组均表现升高(均P＜0.0001)，而LPS+EPCs组及LPS+MHCII-+EPCs组较LPS组均表现降低(均P＜0.0001)，且LPS+MHCII-+EPCs组较LPS+EPCs组又表现明显降低(均P＜0.0001)，LPS+MHCII-+EPCs组较NC组无明显差异(P＞0.05)。d3与d7无明显差异(P＞0.05)。4、RT-PCR检测TLR-4、MHCIImRNA表达，在NC组、LPS组、LPS+EPCs组、LPS+MHCII-+EPCs组d3分别(89.1±55.6、0.303±0.0821)，(2222±924、5.62±0.819)，(743±351、2.98±0.773)，(174±91.2、0.526±0.0745)。d7分别为(93.9±62.3、0.286±0.0639)，(1533±688、4.55±0.697)，(592±144、2.88±0.682)，(156±85.5、0.464±0.109)。LPS组较NC组表达量均表现升高(均P＜0.0001)，而LPS+EPCs组及LPS+MHCII-+EPCs组较LPS组表达量均表现降低(均P＜0.0001)，且LPS+MHCII-+EPCs组较LPS+EPCs组表达量又明显降低(均P＜0.0001)，LPS+MHCII-+EPCs组较NC组无明显差异(P＞0.05)。5、westernblot检测MHCII蛋白表达，NC组、LPS组、LPS+EPCs组、LPS+MHCII-+EPCs组，d3分别为(0.356±0.0669)，(1.49±0.310)，(0.924±0.200)，(0.544±0.0558)LPS组较NC组MHCII蛋白灰度值均升高(均P＜0.0001)，而LPS+EPCs组及LPS+MHCII-+EPCs组较LPS组MHCII蛋白灰度值均表现降低(均P＜0.0001)，且LPS+MHCII-+EPCs组较LPS+EPCs组MHCII蛋白灰度值又表现明显降低(均P＜0.0001)，LPS+MHCII-+EPCs组较NC组无明显差异(P＞0.05)。6、d3实验模型中LPS组MHCII与TLR4、NF-κB、TNF-a、IL-12均呈正相关(r2=0.824、0.867、0.763、0.830，且均p＜0.05)，同时TLR4在基因及蛋白水平呈强正相关(r2=0.991，且均p＜0.001)；LPS+EPCs组MHCII基因相对表达量与IL-12、MHCII蛋白、TLR4mRNA及其蛋白、NF-κB均呈正相关(r2=0.824、0.880、0.978、0.978、0.938，且均p＜0.05)，同时TLR4在基因及蛋白水平呈强正相关(r2=0.998，且p＜0.001)；LPS+MHCII-+EPCs组MHCII基因相对表达量与IL-12、MHCII蛋白、NF-κB、TNF-a、TLR4蛋白均呈正相关(r2=0.965、0.926、0.846、0.795、0.875，且均p＜0.05)，同时TLR4在基因及蛋白水平呈强正相关(r2=0.998，且p＜0.001)。
结论：1、脓毒所致ARDS时炎症因子TLR-4、NF-KB、IL-12、TNF-a明显增高；肺组织MHCII基因及蛋白表达明显增高，TLR-4基因及蛋白表达明显增高；MHCII与TLR-4、NF-KB、IL-12、TNF-a明显正相关。2、EPCs移植可以部分减少TLR-4、NF-KB、IL-12、TNF-a及MHCII的表达；MHCII与TLR-4、NF-KB、IL-12明显正相关。3、MHCII基因干扰后进行EPCs移植，可以明显抑制TLR-4、NF-KB、IL-12、TNF-a及MHCII的表达；且均较单独EPCs移植组明显下降；MHCII与TLR-4、NF-KB、IL-12、TNF-a依然表现为正相关。