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依赖双链RNA(dsRNA)激活的蛋白激酶(PKR)是脊椎动物中由干扰素(Interferon,IFN)介导的抗病毒防御机制的重要组成部分,属丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶超家族和eIF-2α激酶家族,在哺乳动物细胞中广泛存在。鲫鱼类PKR基因(CaPKR-like)是第一个报道的非哺乳类PKR同源物。
为了解CaPKR-like在非哺乳动物各组织中的表达活性,本文采用已经表达的Zα结构域融合多肽(P<,Zα1 Zα2>),经过亲和层析纯化并免疫家兔,制备了CaPKR-likeN-端包含Zα结构域的多克隆抗体。并利用该抗体检测CaPKR-like在鲫鱼与草鱼的正常组织和经Poly I:C诱导后的组织表达特性。Western blots显示在未经诱导的鲫鱼和草鱼各个所检组织(脑、脾、肝、心、肌肉、肾、肠、皮肤)中该基因表达水平非常低,但是经Poly I:C免疫诱导一周后,在鲫鱼和草鱼等8种组织中有较强的PKR-like蛋白产生。其中,在鲫鱼中心脏、肝脏、脾脏、肾、肌肉等组织中该基因表达较强,而在肠道和皮肤的表达略弱。在草鱼中脑、心脏、肌肉、肝脏、皮肤等组织中该基因表达较强,而在脾脏、肠道、肾等组织中表达略弱。
为了解CaPKR-like在鲫鱼细胞中的定位,采用Poly I:C免疫诱导了鲫鱼组织,利用免疫荧光细胞化学技术对PKR基因在鲫鱼组织中的表达进行了分析,结果显示PKR基因在经Voly I:C诱导一周后的鲫鱼细胞比在未经诱导的鲫鱼细胞中表达明显。且发现CaPKR-like主要定位在鲫鱼细胞质中。