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油菜花叶病毒Oil-Seed Mosaic Virus（ORMV）是一种能够侵染十字花科、茄科、葫芦科等植物的RNA病毒，其从属于烟草花叶病毒属Tobamovirus亚属Ⅲ型病毒。其基因组包含4个开放阅读框Open Reading Frame（ORF），分别为编码126kDa和183kDa复制酶蛋白的复制酶基因、运动蛋白基因MP和外壳蛋白基因CP。其中126kDa复制酶蛋白在体外能够特异性地富集21nt大小的small RNA（sRNA），进而影响靶基因的表达。本研究在拟南芥中表达ORMV-126kDa复制酶基因，并进行了初步表型观察和分析，为进一步研究植物内源sRNA的功能打下基础。
本实验以实验室已有的可诱导表达126kDa复制酶基因的拟南芥（Arabidopsis thaliana）为材料，以晚开花株系为背景，利用微滴叶片局部筛选法和赤霉素GA3处理不开花植物获得了双抗纯系晚开花植株。并以晚开花纯系拟南芥为父本与野生型拟南芥母本进行杂交，获得只含应答元件的植株。在此基础上，观察了只含激活元件株系、只含应答元件株系和含双元件株系植株的花期情况，初步证明了晚开花植物与复制酶基因的表达有关。为进一步说明复制酶的反式调节作用，利用农杆菌浸花法，对只含激活元件株系进行侵染，获得了第二个晚开花株系。
本实验还对烟草再生条件进行了初步优化。研究了不同AgNO3浓度及不同结冷胶浓度对烟草再生出芽的影响，同时借助响应面试验设计中心组合实验设计Central Composite Design（CCD）模型，对AgNO3浓度和结冷胶浓度进行了多元线性回归拟合，获得了烟草再生的二者最佳组合条件。
主要研究结果如下：
1.已有的晚开花株系SUC2-31-1-1-1-1以杂合状态繁种，每次分离出“不开花”的单株（占比~1/4）。利用赤霉素GA3（75mg/L）处理这些植物，可诱导其开花并收到种子，通过后代分离比的测定，确定这些单株为纯合单株。
2.发现SUC2-31-1-1-1-1株系的分离群体与对照（w.t.）相比，存在花期一致植株、稍晚开花植株、晚开花植株和不开花植株。
3.发现只含激活元件植株和只含应答元件植株都与野生型拟南芥花期一致，含双元件纯合植株存在晚开花和不开花现象。
4.通过农杆菌浸花法侵染只含激活元件的拟南芥，再次获得一个晚开花表型株系。
5.对野生型本生烟的再生条件进行了摸索和优化，发现：4.5mg/L的硝酸银和9g/L的结冷胶均可以有效地提高本生烟的再生效率。在此基础上，设计实施了双因素响应面试验，发现MS+4.3mg/L AgNO3+8.8g/L结冷胶对烟草再生出芽率条件最优。
本实验以实验室已有的可诱导表达126kDa复制酶基因的拟南芥（Arabidopsis thaliana）为材料，以晚开花株系为背景，利用微滴叶片局部筛选法和赤霉素GA3处理不开花植物获得了双抗纯系晚开花植株。并以晚开花纯系拟南芥为父本与野生型拟南芥母本进行杂交，获得只含应答元件的植株。在此基础上，观察了只含激活元件株系、只含应答元件株系和含双元件株系植株的花期情况，初步证明了晚开花植物与复制酶基因的表达有关。为进一步说明复制酶的反式调节作用，利用农杆菌浸花法，对只含激活元件株系进行侵染，获得了第二个晚开花株系。
本实验还对烟草再生条件进行了初步优化。研究了不同AgNO3浓度及不同结冷胶浓度对烟草再生出芽的影响，同时借助响应面试验设计中心组合实验设计Central Composite Design（CCD）模型，对AgNO3浓度和结冷胶浓度进行了多元线性回归拟合，获得了烟草再生的二者最佳组合条件。
主要研究结果如下：
1.已有的晚开花株系SUC2-31-1-1-1-1以杂合状态繁种，每次分离出“不开花”的单株（占比~1/4）。利用赤霉素GA3（75mg/L）处理这些植物，可诱导其开花并收到种子，通过后代分离比的测定，确定这些单株为纯合单株。
2.发现SUC2-31-1-1-1-1株系的分离群体与对照（w.t.）相比，存在花期一致植株、稍晚开花植株、晚开花植株和不开花植株。
3.发现只含激活元件植株和只含应答元件植株都与野生型拟南芥花期一致，含双元件纯合植株存在晚开花和不开花现象。
4.通过农杆菌浸花法侵染只含激活元件的拟南芥，再次获得一个晚开花表型株系。
5.对野生型本生烟的再生条件进行了摸索和优化，发现：4.5mg/L的硝酸银和9g/L的结冷胶均可以有效地提高本生烟的再生效率。在此基础上，设计实施了双因素响应面试验，发现MS+4.3mg/L AgNO3+8.8g/L结冷胶对烟草再生出芽率条件最优。