重组细菌载体疫苗可引起宿主针对所携载保护性抗原的免疫反应,并具有模拟自然感染、内在佐剂特性、黏膜免疫的潜力并可携带多个的外源抗原等特性,因此是一种非常有潜力的疫苗构建策略。本研究从设计安全有效的多效价载体疫苗出发,首先以大肠杆菌BL21(DE3)作为疫苗载体,从23个候选者中筛选出PviuB限铁调控启动子,该启动子具有高效、严谨和感受体内限铁信号从而自诱导的特性。通过将PviuB和裂解基因E融合,确立一个体内诱导裂解回路,并转入含PT7控制的抗原合成回路的菌株中,形成一新颖的基于体内诱导裂解系统的大肠杆菌载体疫苗。该重组菌株能在体外可控合成大量抗原,进入斑马鱼体内后因感受限铁信号而裂解,实现抗原的体内释放和生物防疫功能。将来自鱼类病原菌嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila LSA34)保护性抗原GAPDH的编码基因gapA引入至该系统,得到的重组载体疫苗在大菱鱼(?)(Scophtalmus maximus)中进行免疫评价,超过80%的免疫鱼可抵御嗜水气单胞菌LSA34的侵染,表明基于体内诱导裂解的大肠杆菌载体疫苗具有很大的应用潜力。为保证体内诱导裂解型细菌载体疫苗的稳定性,所使用表达系统的严谨性尤为重要。因此构建了一个更为严谨调控的表达系统pYPfhuAl.原始启动子PfhuA的调控方式与PviuB一致。为提高PfliuA调控的严谨性,以便用于毒性裂解基因的表达,通过改变启动子区域的Fur box和Fur蛋白的合成设计了5种策略。最终,以大肠杆菌标准Fur box代替PfhuA原始Fur box的策略所得到的启动子PfhuAl在严谨性和转录效率方面都具有很好的表现。进一步实验表明,该载体可功能性地合成裂解基因E和毒性基因gef和MazFo在鳗弧菌宿主中,也以同样的方法筛选到具有较高转录效率和严谨性的限铁诱导的启动子PviuA.分别以野生型鳗弧菌MVM425和减毒活疫苗菌株MVM6203为宿主,使用PviuA、无抗稳定传代的质粒pUTat为载体和来自不同噬菌体的裂解基因,设计了4种裂解策略。实验表明,根据鳗弧菌密码子优化后的裂解基因(命名OE)和使用来自沙门氏菌噬菌体P22的裂解系统13-19-15而得到的重组菌株425/pAVOE、425/pAVP22、6203/pAVOE和6203/pAVP22在限铁诱导后进入裂解状态。裂解效率为90%左右。通过扫描电镜观察裂解后的鳗弧菌形态发现,完全裂解后,菌体呈大的碎片状态,表明优化后的E基因和13-19-15可有效地在PviuA启动子的控制下裂解鳗弧菌。最后,本研究还对柱状黄杆菌(Flavobacterium columnare) ATCC23463这一重要的淡水鱼致病菌做了部分背景研究,包括其铁摄取系统。在该工作中,鉴定并分析了柱状黄杆菌的部分摄铁机理。当生长在体内限铁环境中时，柱状黄杆菌上调合成一个大约86kDa的外膜蛋白。这个蛋白被鉴定为TonB依赖的高铁色素-铁受体前体(FhuA).通过chrome azurol S (CAS)分析,确定柱状黄杆菌可合成铁载体并且组成性分泌铁载体。一个假定的铁调控蛋白(Fur)也在柱状黄杆菌基因组中鉴定出来。结构分析该Fur蛋白显示,它与其他细菌中的Fur蛋白类似。此外,柱状黄杆菌fur基因可部分回补沙门氏菌的fur突变体。因此,可得结论,柱状黄杆菌拥有铁载体介导的铁摄取系统,基fur基因可部分回补沙门氏菌的fur突变体。