目的:探讨大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）的分离、培养、冻存、复苏办法,比较MSCs在平面条件和在三维支架下向软骨细胞诱导的差异,细胞增殖力、细胞周期的变化,以及在裸鼠体内构建组织工程软骨的可能性。方法:采用梯度离心法和贴壁培养法分离MSCs,对所分离细胞进行SH₃免疫组化鉴定,用含70%DMEM培养基、20%FBS、10%DMSO组成的冻存液在4℃、-70℃、-196℃的分阶段降温冻存MSCs,及快速复苏。用TGF-β₁为主的诱导因子在平面条件下或在胶原、明胶支架上将MSCs向软骨细胞诱导,观察细胞在材料上的贴附率,对诱导细胞行Ⅱ型胶原免疫组化、原位杂交检测,MTT法和流式细胞仪检测细胞增殖力、细胞周期变化。将诱导后细胞与胶原海绵、藻酸盐凝胶复合,植入裸鼠体内,4w、8w检测体内组织工程软骨的形成情况。结果:使用以上两种分离方法分离出MSCs,经SH₃免疫组化鉴定,复合MSCs的特征,P1、P5代冻存和复苏细胞数成活率在85%以上,使用的以TGF-β₁为主的诱导因子,在平面条件下或在胶原、明胶支架上将MSCs向软骨细胞诱导,Ⅱ型胶原免疫组化、原位杂交检测均为阳性。MSCs在胶原支架上分泌Ⅱ型胶原数量、细胞增殖力、细胞数均比平面诱导条件下高,MSCs在胶原支架上生长,细胞周期与平面诱导条件下相比未发生明显改变,细胞无畸