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目的:
本试验旨在研究常用静脉麻醉药芬太尼(Fentanyl),对体外培养大鼠胰岛β细胞凋亡相关蛋白bax及bcl-2的表达的影响,并初步探讨其中的机制。
方法:
1、通过用胶原酶P(Collagenas.P)液灌注分离成年SD(Sprague-Dawley)大鼠胰岛,不连续密度梯度离心法(discontinuou.Ficol.densitygradientcentrifugatio.DFDGC)纯化胰岛,双硫腙(dithizon.DTZ)染色鉴定胰岛纯度,AO-PI(aridin.orang.an.propidiu.iodide)染色法鉴定活率,并完成胰岛的体外培养。2、将纯化好的胰岛β细胞随机分为实验组和对照组2组,选择临床上常用的静脉麻醉药芬太尼与实验组胰岛细胞共同培养,24h后检测两组胰岛β细胞凋亡相关蛋白bax及bcl-2的表达情况。
结果:
1、研究中,分离纯化的SD大鼠胰岛细胞纯度为90%左右,活率为95%左右,体外培养中生长良好。
2、经过24小时体外培养后,芬太尼(30ng/ml)处理的胰岛β细胞所表达的促凋亡蛋白bax明显高于对照组(P<0.05);所表达的抑制凋亡蛋白bcl-2明显低于对照组(P<0.05)。
结论:
1、DTZ染色和AO-PI荧光染色可以对分离、纯化后的胰岛质量进行准确的鉴定。
2、芬太尼(30ng/ml)对体外培养的胰岛β细胞有明显的促凋亡作用。