论文部分内容阅读
第一部分新合成化合物DTIO对永久性脑缺血急性期的保护作用及其机制 目的：探究新型合成化合物5-(3’，5’-二甲氧基苯甲撑基)-2-硫代-咪唑-4-酮(5-(3，5 dimethoxybenzal)-2-thio-imidazole-4-ketone,DTIO)对永久性脑缺血急性期的保护作用及其机制。 方法：采用永久性大脑中动脉阻塞(permanent middle cerebral artery occlusion,pMCAO)的方法建立体内脑缺血模型，2,3，5-三苯基氯化四氮唑（TTC)染色法检测脑梗塞体积，神经症状、抓力、圆桶测试法进行神经行为学评分，并用多普勒血流仪监测皮层局部脑血流。在体外，通过培养原代新生大鼠皮层星形胶质细胞，釆用氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation，OGD)方法建立缺氧缺糖细胞模型。光镜法观察OGD诱导的星形胶质细胞细胞形态变化；乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞损伤；Annexin-V-FITC和碘化丙啶（P I)双染色法检测细胞的凋亡坏死率；Western blot和免疫共沉淀检测RIP1K的表达，ELISA法检测肿瘤坏死因子-a(TNF-a)，白细胞介素-Ip(IL-lp),白细胞介素-6(IL-6)水平。 结果：DTIO显著减少pMCAO诱导的脑梗塞体积，改善神经症状(P<0.05)，对正常大鼠脑血流无影响。DTIO可明显增加OGD诱导的细胞数目，降低LDH漏出率和细胞的坏死率(P<0.05，P<0.01)。DTIO可以抑制RIP1K-RIP3K的相互作用，DTIO或REPIK基因沉默均可抑制TNF-a，IL-lp,IL-6的释放(P<0.05)。 结论：DTIO对脑缺血损伤具有保护作用，其作用机制可能是作用在RIP1K靶点上，从而保护星形胶质细胞及抑制其释放炎症因子。 第二部分新合成化合物DTIO对局灶性脑缺血再灌注损伤的恢复期保护作用及其机制 目的：探讨DTIO对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及其可能的作用机制。 方法：在体内，采用线栓法阻断大鼠右侧大脑中动脉，90 mill后拔出进行再灌注，建立大鼠脑缺血再灌注损伤模型。为观察DTIO对脑缺血再灌注损伤恢复期的保护效应，大鼠缺血损伤后尾静脉注射DTIO后再每天单次腹腔注射DTIO28天，分别于再灌注相应时间点进行神经功能评分、脑萎缩体积测定。在体外，培养原代星形胶质细胞，建立氧糖剥夺（OGD)6 h，复氧24h模型，LDH漏出率检测细胞损伤，Western blot和免疫共沉淀检测RIP1K的表达，Western blot、免疫组化/免疫荧光单、双标法检测GFAP，neurocan, phosphacan蛋白表达，ELISA法检测炎症因子TNF-a，IL-lp, IL-6水平。 结果：在体内，DTIO可显著减少脑萎缩体积，改善神经功能症状，DTIO可以抑制RIP1K-RIP3K的相互作用，抑制缺血90 m in再灌注7 d诱导的胶质瘢痕标志蛋白GFAP，neurocan, phosphacan蛋白的表达，此外还可抑制炎症因子TNF-a, IL-lp，IL-6的释放。在体外，DTIO可明显改善OGD/R诱导的星形胶质细胞形态，降低LDH漏出率，DTIO可以抑制RIP1K-RIP3K的相互作用，并下调OGD6h再灌24h诱导的GFAP,neurocan,phosphacan表达，此外，DTIO可抑制炎症因子TNF-a,IL-ip,IL-6的释放。 结论：DTIO对脑缺血再灌注损伤恢复期有保护作用，保护作用可能是与减轻炎症反应，进而减轻胶质瘢痕形成有关。