前言　　人口老龄化一直成为人们关注的焦点之一。2010年我国第六次全国人口普查数据显示，60岁以上人口占总人口的13.26％，达1.77亿人，比2000年上升2.9个百分点，占全世界老龄人口的1/5，成为世界上唯一的老龄人口过亿的国家。老龄人口的数量和生活质量关系到一个国家未来的发展，它的影响涉及到社会的方方面面，其不仅消耗了国家经济发展的成果，而且也给社会和家庭造成了严重的精神压力和经济负担。因此，研究老年人群的健康及其干预措施具有十分重要的理论和实际意义。　　人口的老龄化促使人们更加关注与衰老相关因素的研究，其中脑衰老已成为医学重要的研究课题之一。脑衰老是一个极其复杂的过程，为多种因素共同作用导致脑结构与功能的改变，其最重要的表现是学习和记忆能力的减退。自由基学说认为:代谢过程中产生的活性氧基团或分子(ReactiveOxygenSpecies，ROS)引发的氧化性损伤随着年龄的增长而加剧，当损伤积累的程度超过自身抗氧化防御体系修复程度时，最终导致衰老，主要表现为抗氧化酶活性的降低以及脂质过氧化产物的增多。脑具有耗氧量大、ROS消除系统水平低、产生的途径多于其他系统或器官的生物学特征，致使大脑成为ROS最易侵袭的靶器官。　　流行病学资料调查研究发现，增加蔬菜、水果的摄入量能够显著降低心血管疾病、肿瘤等慢性病的发病率及死亡率。体外一些实验也发现许多蔬菜、水果对ROS有显著清除作用。白藜芦醇(Resveratrol，Res)是近年来备受关注且研究较多的植物化学物，主要存在于葡萄、花生、藜芦等72种植物中，属于非黄酮类多酚化合物。目前研究发现，Res具有广泛的生物学作用，如抗氧化、抗肿瘤、神经保护、心血管保护作用等。近来有研究显示Res能够减轻小鼠缺血再灌注导致的神经损伤，以及对大鼠海马神经元有保护作用等，而关于Res对动物衰老模型脑组织形态及海马细胞保护作用的研究还不多见。　　综上所述，本研究结合前期预实验结果，采用两个剂量(22.5mg/kg.bw.d和45mg/kg.bw.d)的Res对D-半乳糖(D-galactose，D-gal)诱导的小鼠衰老模型进行干预，观察Res对其脑组织形态、海马细胞周期以及氧化应激水平的影响，并初步探讨可能的机制。　　材料和方法　　一、动物的分组与喂养　　16w龄SPF级雄性昆明种小鼠72只，适应性喂养1w后，按体重随机分为基础组、衰老组、干预Ⅰ组、干预Ⅱ组，每组18只。基础组每日颈背部皮下注射生理盐水，其余三组注射200mg/kg.bw.d的D-gal溶液。基础组和衰老组每日给予0.5％的羧甲基纤维素钠溶液灌胃，干预Ⅰ组和干预Ⅱ组分别给予相应浓度的Res溶液灌胃。实验期间，各组小鼠自由摄食、饮水，自然光照，室温20℃～24℃，湿度40％～70％，每周称量体重2次，干预16w。　　二、测定指标及方法　　实验进行到16w木时，每组分别取18只小鼠测定相应的指标:　　（一）一般状态观察　　观察各组小鼠一般状态，包括摄食、饮水、活动、毛色、光泽度等方面变化。　　（二）脑系数测定　　每组随机取12只小鼠乙醚麻醉后处死，取出脑组织，生理盐水洗净后称重，按公式计算脑系数:　　脑系数(mg/g)=脑质量(mg)/体重(g)　　（三）脑组织形态观察　　将每组剩余的6只小鼠，乙醚麻醉下开腹，灌注固定，灌注完毕后断头取脑，矢状面切取脑组织0.1cm，置于4％多聚甲醛中再固定24h，制成HE切片，在显微镜下观察脑组织病理改变。　　（四）海马细胞周期检测　　取12只小鼠50％脑的海马，置于冰冻PBS中剪碎，洗三次，加入0.25％胰酶1ml，37℃恒温水浴30min，消化脑组织，加入DMEM（含10％小牛血清）3ml停止消化，过200目筛网，回收平皿中液体到5mlEP管，低温离心，弃上清，加PBS1ml，转移到2mlEP管内，再次离心，弃上清，制备海马组织单细胞悬液。加入1ml70％乙醇，4℃固定12h。取出固定的细胞，低温离心，弃上清，加PBS1ml，再次离心，弃上清，参照试剂盒说明书进行染色及上机检测。结果用细胞指数及增殖指数(proliferationindex，PI)进行评价。　　PI=(S+G2/M)/(G0/G1+S+G2/M)×100％　　（五）脑组织氧化应激指标及MAO活性测定　　用生理盐水将另外50％脑制成10％脑匀浆液，分别按照各试剂盒说明书测定脑谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathioneperoxidase，GSH-px)、超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase，SOD)、过氧化氢酶(Catalase，CAT)、单胺氧化酶（Monoamineoxidase，MAO）活性和丙二醛(Malondialdehyde，MDA)含量，并采用考马斯亮蓝法测定蛋白含量。　　三、数据处理和统计分析　　实验数据用SPSS13.0统计软件进行分析，实验结果用(X)±S表示，用单因素方差分析比较各组间数据的统计学差异，检验水准:α=0.05。　　结果　　一、一般状态观察结果　　实验期间，衰老组小鼠与基础组相比，行动迟缓，毛色发黄，渐有脱毛现象，干预组状态好于衰老组。　　二、脑系数测定结果　　衰老组低于基础组，干预组高于衰老组，差异均具有统计学意义(P＜0.05)。干预组与基础组相比，差异无统计学意义(P＞0.05)。干预Ⅱ组与干预Ⅰ组比较，小鼠脑系数未见明显改变（P＞0.05）。各组小鼠体重及脑重差异均无统计学意义(P＞0.05)。　　三、脑组织形态观察结果　　从神经细胞形态方面来看，衰老组小鼠脑皮质、海马CA1区及CA3区神经细胞发生变性，细胞排列稀疏;干预组与衰老组相比，变性细胞明显减少，细胞间排列有序。从神经细胞数量方面来看，衰老组均低于基础组，干预组均高于衰老组，差异具有统计学意义(P＜0.05)，干预组与基础组相比，差异均无统计学意义(P＞0.05)。干预Ⅱ组与干预Ⅰ组比较，小鼠神经细胞数量未见明显改变(P＞0.05)。　　四、海马细胞周期检测结果　　与基础组比较，衰老组及干预组G0/G1期百分率升高，S期百分率降低，G2/M期百分率降低，增殖指数降低，差异均具有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05)。与衰老组相比，干预组G0/G1期百分率降低，S期百分率升高，G2/M期百分率升高，增殖指数升高，差异均具有统计学意义(P＜0.01)。干预Ⅱ组与干预Ⅰ组比较，小鼠海马细胞周期各期百分率及增殖指数未见明显改变（P＞0.05）。　　五、脑组织氧化应激指标及MAO活性测定结果　　与基础组相比，衰老组小鼠脑组织GSH-Px、SOD、CAT活性均降低，MAO活性、MDA含量均升高，差异具有统计学意义（P＜0.05），干预组小鼠的相应指标均未见明显改变(P＞0.05)。与衰老组相比，干预组小鼠脑组织GSH-Px、SOD、CAT活性均升高，MAO活性、MDA含量均降低，差异具有统计学意义（P＜0.05）。干预Ⅱ组与干预Ⅰ组比较，小鼠脑组织各氧化应激指标结果未见明显改变(P＞0.05)。　　结论　　1、Res可减缓衰老模型小鼠脑系数的下降。　　2、Res可维持衰老小鼠神经细胞形态及正常结构，减少神经细胞变性。　　3、Res可增强衰老小鼠海马细胞增殖活性，维持海马正常细胞周期。　　4、Res可减轻衰老小鼠脑组织氧化损伤程度，改善氧化应激水平。