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田间鸡球虫感染多为混合感染,为了更好防控鸡巨型和柔嫩艾美球虫的混合感染,本试验制备了巨型和柔嫩艾美鸡球虫共同抗原IMP1C与免疫佐剂EDA结合的双价亚单位疫苗,并对其产生的免疫效果进行评价。方法:将巨型艾美尔球虫和柔嫩艾美尔球虫的共同抗原IMP1C分别与EDA分子佐剂结合,构建p ET28a-EDA-Et IMP1C、p ET28a-EDA-Em IMP1C、p ET28a-Em IMP1C-EDA-Et IMP1C及p ET28a-EDA四种重组质粒并进行原核表达。将表达后的蛋白按150μg/只的剂量对试验鸡(12只/组)进行三次肌肉注射,并分次采取免疫后一周的血清进行IL-12、IL-2、IFN-γ、Ig G等细胞因子的检测,采取三免的全血进行CD4~+和CD8~+T淋巴细胞亚群检测。在三次免疫后,对试验鸡分组饲喂2×10~4个柔嫩艾美尔球虫及巨型艾美尓球虫孢子化卵囊,攻毒后第5天剖解观察病变并制作病理切片,收集攻毒后5～10天的粪便采用麦克马斯特计数法对球虫卵囊计数,观察并记录死亡数量,称量攻毒前后体重。结果:(1)成功构建原核表达载体并表达出相应蛋白,蛋白经Ni2+柱层析法及尿素透析法纯化,p ET28a-EDA-Et IMP1C及p ET28a-EDA-Em IMP1C蛋白大小为38k Da,p ET28a-Em IMP1C-EDA-Et IMP1C蛋白大小为63.8k Da,p ET28a-EDA蛋白大小为10.8k Da。(2)在细胞免疫方面,Em IMP1C-EDA-Et IMP1C组血清中IL-2、IFN-γ的含量均高于EDA-Et IMP1C组和EDA-Em IMP1C组,全血中CD4~+T淋巴细胞数量最高的为Em IMP1C-EDA-Et IMP1C组,蛋白免疫组CD8~+T淋巴细胞差异不明显(P>0.05),但均明显高于EDA佐剂组及PBS空白组(P<0.05);血清中IL-12浓度最高的为Em IMP1C-EDA-Et IMP1C组,其次为EDA-Et IMP1C组和EDA-Em IMP1C组,但均明显高于EDA佐剂组及PBS空白组(P<0.05)。(3)在体液免疫方面,Em IMP1C-EDA-Et IMP1C组Ig G抗体经1:1600的比例稀释,浓度仍高于EDA-Et IMP1C组和EDA-Em IMP1C组。(4)Em IMP1C-EDA-Et IMP1C组试验鸡体增重明显,抗柔嫩艾美尔球虫组增重率为82.11%,抗巨型艾美尔球虫组增重率为85.86%;空盲肠道病变程度轻,抗柔嫩艾美尔球虫组肠道病变计分为1.19,抗巨型艾美尔球虫组肠道病变计分为0.89;卵囊排出量少,抗柔嫩艾美尔球虫组球虫卵囊排出减少率为84.01%,抗巨型艾美尔球虫组球虫卵囊排出减少率为79.12%;抗柔嫩艾美尔球虫指数为176,抗巨型艾美尔球虫指数为183。结果表明:抗巨型及柔嫩艾美尔球虫双价疫苗组能够成功激活体液及细胞免疫,并产生交叉免疫保护,抵抗巨型及柔嫩艾美尔球虫感染的效果较单价疫苗组更佳。