硫磺菌子实体多糖的分离纯化及生物活性研究

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硫磺菌(Laetiporus sulphureus)又名硫磺多孔菌、硫色多孔菌,是我国东北地区一种珍贵野生真菌。可食用,同时又具有调节机体、增进健康与抵抗疾病的作用。本研究以野生硫磺菌为实验原料,采用水提醇沉法提取硫磺菌粗多糖,分别考察液料比、提取温度、提取时间,提取次数对硫磺菌粗多糖提取率的影响。继而根据单因素实验考察结果,设计响应面实验优化确定硫磺菌粗多糖提取条件为:液料比,34;提取温度,100℃;提取时间,4h;提取次数,2次。在此优化提取条件下,硫磺菌粗多糖的实际提取率可达4.44%?0.45%,与响应面预测的理论提取率4.47%接近,说明响应面模型效果显著,能够很好地拟合多糖提取条件。结合反复冻融、蛋白酶水解、Sevag提取和透析等方法,除去硫磺菌粗多糖中蛋白质和其他杂质成分,得到纯化硫磺菌多糖LSP。结合DEAECellulose DE-52阴离子交换层析和Sepharose CL-6B凝胶层析纯化分离得到3个主要的均一多糖组分,LSP I-b、LSP II-a和LSP II-b。其多糖含量分别为98.7%,89.9%和92.7%,三个多糖样品均含有蛋白成分,但不含糖醛酸成分。红外分析显示,LSP I-b、LSP II-a和LSP II-b的特征吸收峰均为真菌多糖所特有。最后检测多糖体外抗氧化活性以及抑菌能力以验证多糖组分的生物学活性。体外抗氧化结果表明,LSP I-b、LSP II-a和LSP II-b对于超氧阴离子、羟基与DPPH自由基均具有清除作用。总体来看清除作用的效果依次是DPPH>超氧阴离子>羟基自由基。相较于LSP II-b,LSP I-b和LSP II-a清除DPPH自由基的能力及总还原力较低,但是具有较强的超氧阴离子自由基和羟基自由基清除能力。LSP、LSP I-b、LSP II-a和LSP IIb的抗氧化能力均具有浓度依赖性。抑菌实验显示,实验浓度范围内,硫磺菌多糖对于金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均不具有抑制能力。
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