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严重急性呼吸系统综合征（Severe Acute Respiratory Syndrome,SARS）又称传染性非典型肺炎,是由SARS冠状病毒（SARS-associated coronavirus,SARS-CoV）感染引起的一种严重急性呼吸系统传染病。2002～2003年间SARS的暴发流行,涉及数十个国家和地区,全球病例高达9096例。目前尚无安全有效的SARS疫苗。 核酸疫苗是SARS疫苗研究的重点。核酸疫苗不但兼有减毒活疫苗诱导全面免疫应答和重组亚单位疫苗安全的特点,而且具有研制周期短,生产工艺简单,成本低等优点,代表了SARS疫苗研发的发展方向。目前SARS核酸疫苗的研究主要以其结构蛋白S、N和M作为靶标构建重组质粒DNA,免疫小鼠则均可诱导产生体液免疫应答和细胞免疫应答。但核酸疫苗主要的缺点是免疫原性较低。 为此,本研究对SARS-CoV的S和N基因进行密码子优化,观察其在小鼠中的免疫原性,并进一步采用原核表达的重组N蛋白与含有N基因的重组质粒DNA进行联合免疫,分析其诱导免疫应答水平的差异,观察对靶抗原基因密码子优化以及与重组蛋白联合免疫这两种策略提高SARS核酸疫苗免疫原性的效果,为研制具有高免疫原性的SARS核酸疫苗提供依据。 首先,我们采用RT-PCR扩增获得长为2307bp、1632bp和1269bp的cDNA分子,分别编码SARS-CoV的S1（1～768aa）、S2（712～1255aa）和全长的N蛋白。将扩增产物分别克隆至pVAX1真核表达载体,获得重组质粒pVS1、pVS2和pVN。同时对SARS-CoV的S基因和N基因进行密码子偏好分析,发现其与人冠状病毒OC43株和229E株较为相近,但与哺乳动物则差异较大。以哺乳动物偏好密码子对S2和N蛋白进行反编译后获得优化S/N基因（opt-S2和opt-N）,其G+C%含量有明显的提高。Opt-N和opt-S2基因序列的G+C%分别由48%提高至70%和由41%提高至64%,密码子第三位的G+C%则均提高至100%。将优化基因人工合成后同样克隆至pVAX1真核表达载体获得重组质粒pVeS2和pVeN。然后,分别将上述5种重组质粒DNA转染BHK21真核细胞,48hr后通过间接