论文部分内容阅读
背景和目的 心房颤动(房颤)是临床上最常见的快速型心律失常,心房电重构是主要作用机制之一。3型小电导钙激活钾通道(small conductance calcium activated potassium channel 3,SK3)属于小电导钙激活钾通道家族的亚型之一,已证实在心房肌细胞中有丰富表达,主要参与心肌细胞动作电位的复极时程,其功能异常在房颤的发病中起着重要的作用。microRNA是一类高度保守性的内源性非编码小分子RNA,通过与靶基因mRNA的3’-非编码区(3’-untranslated region,3’-UTR)结合,对靶基因的表达进行转录后水平的调节。研究表明相关micro RNA可通过调控其靶基因离子通道在心房表达水平,参与房颤心房电重构,但目前多集中于钙离子通道和内向整流性钾离子通道调控的研究,对于SK3的研究相对较少。生物信息学预测表明,编码SK3的KCNN3是microRNA-155(miR-155)调控的靶基因之一。miR-155在冠心病、高血压、心肌肥厚、心力衰竭等多种疾病起调控作用,已证实miR-155在房颤患者心房中表达上调。本研究通过检测风湿性心脏瓣膜病合并房颤患者右心耳组织miR-155和SK3表达,并利用miR-155 mimic和miR-155 inhibitor寡核苷酸干预人心肌细胞,构建miR-155过表达和低表达人心肌细胞模型,初步探讨miR-155在房颤心房SK3离子通道重构的作用。方法 收集因风湿性心脏瓣膜病进行外科换瓣手术患者的右心耳组织67例,根据心电图或动态心电图分为房颤组(31例),窦律组(36例);利用实时荧光定量PCR(Real time quantity PCR,RT-qPCR)分别检测两组患者右心耳miR-155表达水平,免疫组化检测SK3在右心耳组织的表达分布;分别利用RT-qPCR和免疫印迹法(Western blot,WB)检测SK3 mRNA、蛋白表达水平;分别利用化学合成寡核苷酸miR-155 mimic和miR-155 inhibitor干预人心肌细胞系(AC16细胞系),构建mi R-155过表达和低表达模型,继续培养48小时后,利用RT-qPCR和WB分别检测干预后各组细胞SK3 mRNA和SK3蛋白表达水平,观察miR-155过表达和低表达对AC16细胞SK3 mRNA和蛋白表达水平的影响。结果 (1)房颤组右心耳miR-155表达水平较窦律组显著上调(1.292±0.261vs 0.310±0.161,P<0.01)。(2)房颤组右心耳SK3 mRNA表达水平与窦律组无显著差异(0.855±0.295vs 0.917±0.253,P>0.05),但房颤组右心耳SK3蛋白表达水平较窦律组显著下调(0.182±0.043 vs0.302±0.064,P<0.01)。(3)两组患者右心耳miR-155表达水平与SK3蛋白表达水平呈负相关(r=-0.735,P<0.01)。(4)体外细胞干预实验显示,miR-155 mimic或miR-155 inhibitor两者均对SK3 m RNA的表达无影响,但miR-155可在蛋白水平影响SK3表达,miR-155 mimic显著减少AC16细胞SK3蛋白表达,而miR-155 inhibitor则显著增加SK3蛋白表达。结论 房颤患者心房miR-155表达上调,可能通过下调心房SK3蛋白表达水平参与心房电重构,在房颤的发生与维持起作用。