超氧化物歧化酶是体内自由基主要清除剂之一，简称为SOD。现已证明树莓是富含SOD的水果资源。本文以树莓为原料，通过盐析、凝胶层析、离子交换和金属螯合亲和层析等步骤对树莓SOD进行纯化，对其部分性质进行研究。然后针对SOD作为药用酶的缺陷，对树莓SOD进行了化学修饰与固定化研究。这些为树莓SOD的进一步深入研究及其在药品、保健食品和化妆品的应用打下了一定基础。本试验主要结果如下： 第一，对抽提缓冲液的pH值、抽提体积和抽提次数进行优化，得出最佳的抽提条件：pH值为7.8，抽提体积为1.5倍，抽提次数为2次。同时，通过(NH<,4>)<,2>SO<,4>盐析沉淀实现分级分离，考察了不同(NH<,4>)<,2>SO<,4>饱和度沉淀的酶活力，得出(NH<,4>)<,2>SO<,4>饱和度为50％～90％时，能够达到最大酶活。 第二，利用凝胶层析初步纯化树莓SOI)。纯化条件：柱体1.6cm×60cm；磷酸盐缓冲液pH7.8、2.5mmol/L；流速0.3mL/min；每管收集3.0mL。经过SephadexG.100层析分离纯化得到3种SOD同工酶。分别通过DEAE-52层析和金属螯合亲和层析进一步对树莓SOD纯化，并比较两者纯化效果。DEAE-52层析纯化条件：柱体2.6cmx60cm；梯度洗脱液pH7.8、2.5mmol/L(250mL)～200mmol/L(250mL)磷酸盐缓冲液；流速0.7m12min；每管收集3.5mL。金属螯合亲和层析纯化条件：柱体1.0cmx40cm；离子载体0.1mol/LCuSO<,4>；柠檬酸缓冲液pH5.0、0.1mol/L；流速0.5mL/min；每管收集5mL。通过比较得出，金属螯合亲和层析比DEAE-52层析纯化SOD的回收率高20.4％，相对应的纯化倍数高119.4，因此金属螯合亲和层析更有利于SOD的进一步纯化。 第三，利用SOD活性染色和SDS.PAGE电泳进行纯度鉴定和亚基分子量测定。3种SOD均达到电泳纯；3种SOD的亚基分子量分别为：SOD Ⅰ为24000D，SODⅡ为22000D，SODⅢ为18000D。并对树莓SOD的理化性质进行研究，即SOD敏感性试验，最大紫外吸收峰和温度、pH值、离子强度及金属离子等因素对SOD的影响。3种酶最大紫外吸收峰均为280nm；均对：KCN和H<,2>O<,2>不敏感，说明这3种酶都属于Mn-SOD；SOD具有较好的温度稳定性，最适温度为40℃；在pH7.0～9.0范围内SOD相对酶活力较高，保持在80％左右，pH过高或过低SOD均易失活；3种SOD受离子强度的影响较小，金属离子Al<3+>、Cu<2+>、Mg<2+>、K<+>、Ca<2+>、Zn<2+>具有一定程度的激活作用，而pb<2+>、Fe<3+>、Sn<2+>则具有非常明显的抑制作用。 第四，应用4种氧化降解法，主要包括：H<,2>O<,2>法、HAC-H<,2>O<,2>法、H<,2>O<,2>-NaClO法和NaBO<,3>法，在优化条件下制备了4种低聚水溶性壳聚糖。用4种低聚水溶性壳聚糖对树莓SOD进行化学修饰，H<,2>O<,2>法制备的低聚水溶性壳聚糖作为修饰剂得到的修饰酶总活力较高，可达到712.38 U/mL。SOD经H<,2>O<,2>法制备的低聚水溶性壳聚糖修饰后，SOD氨基修饰率为59.27％，SOD活性保持率为63.12％。修饰SOD的温度稳定性、pH稳定性均明显提高，同时与天然SOD相比，修饰SOD的木瓜蛋白酶酶切耐受性明显增强。修饰酶的体外半衰期486.71h，天然酶的体外半衰期为94.27h，修饰酶的体外半衰期较天然酶体外半衰期延长了4倍。结果表明，低聚水溶性壳聚糖修饰SOD是可行的，并可作为一种较好的修饰SOD的化学修饰剂。 第五，本文对壳聚糖采取不同处理方法，对树莓SOD进行固定化，筛选出了较优的壳聚糖载体的制备方法，确定了壳聚糖粉固定化SOD制备的条件，并考察固定化SOD的酶学性质。结果表明，以壳聚糖为载体，戊二醛交联法制备固定化SOD，优化条件下活化中戊二醛浓度取0.4％制备的固定化酶，所得壳聚糖酶粉活力为192U/g，酶活回收率为34％，热稳定性和酸碱稳定性较天然酶有很大的提高，且具有良好的贮存稳定性，可实现固定化酶粉的反复使用，提高了利用率。