细胞在长期进化过程中发展出了一套保证细胞周期中DNA复制和染色体分配质量的检查机制，通常被称为细胞周期检测点(checkpoint)。有丝分裂前期检测点CHFR(checkpointwithFHAandringfinger)蛋白在正常组织中广泛表达，其结构和功能都十分保守，许多研究表明CHFR在细胞分裂过程中发挥着重要作用。细胞分裂存在有丝分裂应力时，CHFR通路激活引起Plk1的泛素化并使Plk1降解，继而控制细胞周期激酶Cdc2的活性，延迟染色体凝集和中心体分离，将细胞阻滞于有丝分裂前期，CHFR的表达增强细胞对有丝分裂应力的生存能力。本课题研究CHFR在白血病细胞株及白血病细胞骨髓单个核细胞中表达情况，评价CHFR与白血病发生的关系，探讨CHFR作为白血病治疗靶点的可能性和有效性。 第一部分;CHFR在急性白血病骨髓细胞中的表达意义 目的：探讨CHFR在急性白血病骨髓细胞中的表达及生物学意义。 方法：用RT-PCR方法、共聚焦显微镜及免疫组织化学方法检测CHFRmRNA和蛋白在白血病细胞株HL-60及急性白血病患者骨髓细胞中的表达。 结果：免疫组织化学和RT-PCR分析表明，28例急性髓细胞白血病(AML)中的15例，18例急性淋巴细胞白血病(ALL)中的13例骨髓单个核细胞Chfr基因mRNA和蛋白的表达与正常对照组相比有显著下降(P＜0.01)。同时Chfr基因表达异常病例染色体检查存在核型异常。 第二部分:CHFR在急性白血病骨髓细胞中和细胞周期中的表达 目的：探讨成人急性白血病(AL)患者骨髓细胞中有丝分裂早期检测点CHFR基因的表达及其临床意义。 方法：采用流式细胞术检测HL-60细胞周期，共聚焦显微镜检测不同细胞周期细胞CHFR的表达，逆转录PCR(RT-PCR)对45例初治及20例复发的AL患者进行CHFR基因mRNA水平的检测，其中随机抽取32例AL患者，用免疫印迹法检测CHFR基因蛋白表达水平。8例正常人作为对照。 结果：(1)HL-60细胞株CHFR蛋白表达水平与S期细胞所占比例相关。(2)60％(27/45)的ALA患者CHFRmRNA表达水平和40.6％(13/32)的AL患者CHFR的蛋白表达水平与正常对照组相比有明显下降(P＜0.01)。(3)复发组急性淋巴细胞性白血病(ALL)患者的CHFR蛋白中位表达水平(0.71)明显高于初治组(0.38)，差异有统计学意义(t=2.54，P=0.017)。(4)CHFR蛋白或mRNA高表达患者完全缓解率(分别为30.2％，42.4％)明显低于CHFR蛋白或mRNA低表达患者(分别为88.6％，85.4％)，差异有统计学意义(P＜0.05)。 第三部分:急性白血病细胞CHFR基因启动子甲基化研究 目的：研究白血病细胞有丝分裂检测点CHFR基因启动子是否存在甲基化。 方法：采用RT-PCR检测CHFR基因在Molt-4、Jurkat和U937细胞的表达，用甲基化特异性PCR(MS-PCR)检测上述白血病细胞系及41例白血病患者CHFR基因甲基化情况，用5-氮杂胞苷(5-aza-dc)对白血病细胞系进行去甲基化处理。 结果：CHFR基因启动子在正常骨髓细胞中无甲基化，在、JurkatandU937细胞CHFR基因由于启动子甲基化而不能表达，Molt-4细胞CHFR基因由于启动子部分甲基化而表达较弱，上述细胞系经去甲基化处理后可恢复表达CHFR。41例急性白血病患者骨髓细胞有16例(39.02％)存在CHFR启动子甲基化。 第四部分:白血病细胞株CHFR表达与有丝分裂阻滞剂的关系 目的：研究白血病细胞株HL-60、K562、Molt-4、Raji、Jurkat和U937细胞CHFR的表达与有丝分裂阻滞剂Nocodazole的关系。 方法：采用RT-PCR检测CHFR基因在HL-60、K562、Molt-4、Raji、Jurkat和U937细胞的表达，用MS-PC检测HL-60，K562，Jurkat和U937细胞株CHFR基因甲基化情况，用Nocodazole处理上述细胞，流式细胞仪检测细胞周期及凋亡变化。 结果：HL-60和K562细胞CHFRmRNA阳性表达，其启动子无甲基化；Molt-4细胞CHFRmRNA有较弱表达，Raji、JurkatandU937细胞CHFRmRNA不表达，JurkatandU937细胞CHFR启动子存在甲基化。用Nocodazole处理HL-60、K562、JurkatandU937细胞，JurkatandU937细胞的凋亡率显著高于HL-60和U937细胞。