【摘 要】
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植物的细胞骨架由两种重要的蛋白多聚体微丝(Actinfilaments-AFs)和微管(Microtubule-MTs)的网络构成。植物微丝骨架参与多种细胞生物学过程,如维持细胞分裂,保持细胞质的完
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植物的细胞骨架由两种重要的蛋白多聚体微丝(Actinfilaments-AFs)和微管(Microtubule-MTs)的网络构成。植物微丝骨架参与多种细胞生物学过程,如维持细胞分裂,保持细胞质的完整性,胞内运输及维持细胞形态。单体肌动蛋白(G-actin)和丝状肌动蛋白(AFs)之间的动态转换是其行使功能基础,并且受到一系列微丝结合蛋白(actinbindingproteins-ABPs)的精细调控。近来,在棉纤维细胞中发现一类新的微丝结合蛋白-G/zCCFE,其同源基因包含两个保守的未知功能结构域(DUFs),DUF761(293-330 残基)和 DUF4408(42-75 残基),这两个结构域均可在拟南芥DUF761家族中发现。CFEs作为一类新的微丝结合蛋白家族,在其它植物中是否广泛存在以及其在拟南芥中的生理生化功能依然未知。本文以拟南芥作为研究材料,通过生物信息学,分子生物学和生物化学等方法,对CFEs蛋白家族(本文在拟南芥中将其命名为DUF761家族)进行研究,并取得了以下结果:1)发现了 DUF761蛋白家族可能起源于裸子植物并广泛存在于维管植物中。根据对从藻类到被子植物61个物种的DUF761家族同源基因序列分析发现,只在裸子植物和被子植物中有DUF761同源基因存在,并且在已分析的各个维管植物中均有同源基因存在。2)获得了 DUF761家族蛋白的组织定位。通过实时荧光定量PCR和GUS化学组织染色分析发现,除去DUF761-7,拟南芥DUF761家族其它成员在拟南芥各个组织均有表达,推测该家族广泛参与了拟南芥的生长发育过程。3)鉴定得到了 DUF761家族基因的功能缺失突变体。通过对T-DNA插入突变体的基因型分析和定量PCR分析,证实了 T-DNA插入突变体766和337为基因DUF761-1,458为基因DUF761-5,006和583为基因DUF761-7的功能缺失突变体。并进一步通过CRISPR-Cas9基因编辑技术获得了其它DUF761家族基因的编辑突变体。4)构建了 DUF761家族蛋白的亚细胞定位表达载体及原核表达载体,并初步探索了该家族蛋白体外原核表达诱导和纯化条件,为进一步阐明该家族蛋白特性奠定了基础。
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