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目的研究小鼠孤雌囊胚(实验组)及精卵结合囊胚(对照组)A、B、C三个级别内细胞团(ICM)形成胚胎干细胞的发育潜能,为探索孤雌胚胎发育特点、发育潜能以及孤雌胚胎干细胞后续分化能力提供实验数据。方法应用HMG和HCG联合法雌鼠促排卵,实验组的MⅡ卵化学联合法激活形成孤雌胚胎,对照组合笼饲养、自然受精形成受精卵,两组体外培养至囊胚阶段,分别获取A、B、C三个级别的内细胞团,置于饲养层细胞进行传代培养至干细胞阶段,检测不同组间胚胎干细胞标志物碱性磷酸酶和端粒酶表达水平,并应用透射电子显微镜观察各组胚胎干细胞的形态和超微结构。结果实验组与对照组囊胚的A、B级内细胞团形成的胚胎干细胞标志物碱性磷酸酶表达水平相同(A级两组68.39±7.92、65.79±7.42;B级两组66.5±8.32、66.16±8.68),差异不显著(P>0.05);两组囊胚的C级内细胞团形成的胚胎干细胞碱性磷酸酶表达水平不同(C级两组24.98±4.37、44.26±4.19),实验组较低,差异具有统计学意义(P<0.05)。实验组内比较,囊胚A级、B级内细胞团形成的孤雌胚胎干细胞碱性磷酸酶表达水平相同(A级68.39±7.92;B级66.5±8.32),差异不显著(P>0.05),C级内细胞团形成的孤雌胚胎干细胞碱性磷酸酶表达水平低于A级、B级(C级24.98±4.37),差异有统计学意义(P<0.05)。实验组与对照组囊胚的A、B级内细胞团形成的胚胎干细胞标志物端粒酶表达水平相同(A级两组10.18±1.52、10.00±1.24;B级两组10.00±1.50、10.11±1.43),差异不显著(P>0.05);两组囊胚的C级内细胞团形成的胚胎干细胞标志物端粒酶表达水平不同(5.67±1.43、8.94±0.99),实验组较低,差异具有统计学意义(P<0.05);实验组内比较,孤雌囊胚的A级、B级内细胞团形成的孤雌胚胎干细胞标志物端粒酶表达水平相同(A级10.18±1.52、B级10.00±1.50),差异不显著(P>0.05);孤雌囊胚C级内细胞团形成的孤雌胚胎干细胞端粒酶表达水平低于A级与B级(C级5.67±1.43),差异有统计学意义(P<0.05)。透射电子显微镜下观察孤雌囊胚A、B级内细胞团形成的孤雌胚胎干细胞的超微结构完整性保持较好、形态简单规整,细胞间隙基本不可见,皮质区内含有大量球状线粒体,体积小且数量多,形态正常,胞质内仅可见少量空泡;孤雌囊胚C级内细胞团形成的孤雌胚胎干细胞的超微结构不规则,核糖体数目较少,形态也相对不规整,体积明显肿胀变圆,凋亡情况较常见,细胞基质增多变浅,嵴减少或消失,部分细胞胞质内线粒体肿胀失去正常形态,部分转变为形态、大小不等的空泡。结论1.小鼠孤雌囊胚A、B级内细胞团形成的孤雌胚胎干细胞碱性磷酸酶、端粒酶表达活性相同,C级内细胞团形成的孤雌胚胎干细胞碱性磷酸酶、端粒酶表达活性低于A、B级内细胞团。2.小鼠孤雌囊胚具有较好的发育潜能及后续分化能力,A级与B级内细胞团后续发育潜能较好,尤以A级最佳。