论文部分内容阅读
泡桐具有生长速度快和轮种周期较短等特点,因而其对土壤养分的消耗较大,同时对养分的需求较高。微生物肥料具有提供养分、改善土壤理化性质、提高作物产量和品质等功能,部分的微生物肥料还可起到一定的抗病害和抗虫害的作用。
为泡桐人工林的可持续生产,本研究主要针对泡桐人工林根际土壤中的微生物进行研究,筛选出同时具有溶磷解钾拮抗能力的菌株A4,并对菌株的最适发酵及产孢条件进行了探究,为泡桐的微生物肥料开发提供理论支持。研究结果如下:
(1)在泡桐根际土壤浸出液中经过溶磷初筛发现了具有溶磷能力的菌株共50株,通过溶磷复筛一共得到溶磷能力较为突出的A3、A4、A7、A8、C2、C4、D1、E3、E4、E7共10株菌株。将以上10株溶磷菌株进行解钾能力的探究,一共发现4株菌株(A4、A8、C2、E4)同时具有溶磷和解钾能力。
(2)以胶孢炭疽菌作为病原菌,4株溶磷解钾菌作为待测菌株,运用平板对峙法在PDA培养基上对菌株的拮抗能力进行探究,经过筛选发现A4菌株有明显的抑菌带产生。在室内毒力测定中,发现菌株的活性提取浓度达到70μg/mL时,其对病原菌的抑菌效果接近化学农药必菌鲨。
(3)A4菌株经鉴定为革兰氏阴性菌,该菌株菌落呈现淡黄色,圆形,光滑,且较为容易挑取。经过16S rDNA测序和系统进化树比对,A4菌株与洋葱伯克霍尔德氏菌达到了99%的同源性,综合其形态特征,判定A4菌株为洋葱伯克霍尔德氏菌(Burkholderia cepacia)。
(4)在对菌株的发酵探究中,菌株溶磷发酵的蒙金娜无机磷液体培养基最适的碳源及氮源是葡萄糖和硫酸铵,最适NaCl浓度为0.3g/L,最适培养条件为以2%的接种量、pH7、28℃、180rpm摇床培养5d;菌株解钾发酵的解钾培养基最适碳源、氮源和无机盐源分别为麦芽糖、蛋白胨和磷酸二氢钾,最适培养条件为8%的接种量以pH7、28℃、180rpm摇床培养48h;菌株拮抗发酵的基础发酵培养基最适组合为4%玉米粉、4%蛋白胨、0.06%CuSO4·7H2O、0.06%ZnCl2作为碳源、氮源及无机盐源,以10%的接种量、装液体积为50mL在pH7的环境中进行摇床发酵36h。在菌株的产孢探究中,最适培养条件为12%接种量、12h种龄、pH7、发酵时间60h以及50mL装液量,最适培养基组合为1%玉米粉、3%黄豆饼粉和0.3%MnSO4·H2O作为碳源、氮源及无机盐源。
为泡桐人工林的可持续生产,本研究主要针对泡桐人工林根际土壤中的微生物进行研究,筛选出同时具有溶磷解钾拮抗能力的菌株A4,并对菌株的最适发酵及产孢条件进行了探究,为泡桐的微生物肥料开发提供理论支持。研究结果如下:
(1)在泡桐根际土壤浸出液中经过溶磷初筛发现了具有溶磷能力的菌株共50株,通过溶磷复筛一共得到溶磷能力较为突出的A3、A4、A7、A8、C2、C4、D1、E3、E4、E7共10株菌株。将以上10株溶磷菌株进行解钾能力的探究,一共发现4株菌株(A4、A8、C2、E4)同时具有溶磷和解钾能力。
(2)以胶孢炭疽菌作为病原菌,4株溶磷解钾菌作为待测菌株,运用平板对峙法在PDA培养基上对菌株的拮抗能力进行探究,经过筛选发现A4菌株有明显的抑菌带产生。在室内毒力测定中,发现菌株的活性提取浓度达到70μg/mL时,其对病原菌的抑菌效果接近化学农药必菌鲨。
(3)A4菌株经鉴定为革兰氏阴性菌,该菌株菌落呈现淡黄色,圆形,光滑,且较为容易挑取。经过16S rDNA测序和系统进化树比对,A4菌株与洋葱伯克霍尔德氏菌达到了99%的同源性,综合其形态特征,判定A4菌株为洋葱伯克霍尔德氏菌(Burkholderia cepacia)。
(4)在对菌株的发酵探究中,菌株溶磷发酵的蒙金娜无机磷液体培养基最适的碳源及氮源是葡萄糖和硫酸铵,最适NaCl浓度为0.3g/L,最适培养条件为以2%的接种量、pH7、28℃、180rpm摇床培养5d;菌株解钾发酵的解钾培养基最适碳源、氮源和无机盐源分别为麦芽糖、蛋白胨和磷酸二氢钾,最适培养条件为8%的接种量以pH7、28℃、180rpm摇床培养48h;菌株拮抗发酵的基础发酵培养基最适组合为4%玉米粉、4%蛋白胨、0.06%CuSO4·7H2O、0.06%ZnCl2作为碳源、氮源及无机盐源,以10%的接种量、装液体积为50mL在pH7的环境中进行摇床发酵36h。在菌株的产孢探究中,最适培养条件为12%接种量、12h种龄、pH7、发酵时间60h以及50mL装液量,最适培养基组合为1%玉米粉、3%黄豆饼粉和0.3%MnSO4·H2O作为碳源、氮源及无机盐源。