在养蜂业中,常使用抗生素来预防和治疗蜂群疾病,如果用药过量或者用药方式不当,则会导致蜂蜜中存在抗生素残留,给人体健康造成严重危害。世界各国政府对蜂蜜中抗生素残留的监督检测都高度重视。目前,很多国家包括我国对动物源性食品中的抗生素残留均提出了严格的限量标准。本研究以5种氟喹诺酮类抗生素、3种四环素类抗生素、4种磺胺类抗生素、2种硝基咪唑类抗生素和氯霉素为检测对象,建立了蜂蜜中这15种抗生素残留同时提取净化和检测的方法,主要研究内容如下:1)建立了蜂蜜中15种抗生素残留同时检测的高效液相色谱检测方法。采用紫外检测器进行检测,通过实验确定了紫外检测波长为274 nm和315 nm。考察了色谱柱、流动相组成及pH、流动相梯度、流速和柱温对15种抗生素保留和分离的影响。结果选择色谱柱为Welch Ultimate AQ-C18柱(250 mm×4.6 mm, 5μm),流动相为乙腈-磷酸水溶液(pH2.50),梯度洗脱,流动相流速为1 mL/min,柱温为35℃。采用本方法进行检测时,15种抗生素的检出限为9.70-12.54μg/kg,定量限为32.34-41.80μg/kg。15种抗生素在0.2-20.0μg·mL-1浓度范围内相关系数均大于0.99,线性关系良好。2)对样品的提取和净化过程进行反复的摸索,确定了最佳的前处理方案,并对前处理条件进行了优化。在实验中对固相萃取小柱、提取液pH、洗脱液组成、洗脱液用量和洗脱速率等条件进行了优化。最终采用pH2.0的磷酸水溶液溶解蜂蜜样品,选择Cleanert PCX固相萃取小柱作为净化柱,用9 mL浓度为5%的氨化甲醇进行洗脱,洗脱速率为1 mL/min。对蜂蜜进行加标回收率实验,15种抗生素的平均回收率为60.1%-105.2%,相对标准偏差(RSD)小于10%,能够满足多残留分析的要求。3)采用已建立的酸性水溶液溶解-固相萃取小柱净化-高效液相色谱检测的方法,来检测市售的3种不同品牌的蜂蜜中是否含有抗生素残留,采用液质联用对检出的阳性样品进行确证,在其中一种品牌的蜂蜜中检出了四环素类抗生素残留。采用本方法检测时三种不同品牌蜂蜜的样品加标回收率分别为65.5%-100.8%、60.1%-98.7%、64.7%-105.1%,相对标准偏差(RSD)均在10%以下。4)对本方法的不确定度来源进行了探讨和评估,通过对不确定度的评估,可以找出实验过程中对不确定度影响较大的因素,从而采取措施尽量避免,提高检测结果的可信度。通过对不确定度的评估发现,本方法的不确定度主要来源于标准溶液浓度和样品加标回收率的重复性,因此在检测过程中这两个环节需引起重视。