目的 利用细胞色素C直接作用于HL-60细胞，检测不同浓度的细胞色素C诱发白血病细胞株HL-60出现的不同效应以及细胞色素C诱导HL-60细胞凋亡与细胞周期的关系，并同时检测细胞色素C诱导HL-60细胞凋亡时细胞浆Ca²⁺浓度的变化，以初步探讨细胞色素C诱导HL-60细胞凋亡的作用机制。 方法 （1）利用流式细胞仪技术检测不同浓度的细胞色素C诱导HL-60细胞出现的不同效应以及细胞色素C诱导HL-60细胞凋亡与细胞周期的关系。（2）应用琼脂糖凝胶电泳法检测不同浓度的细胞色素C诱导HL-60细胞出现凋亡的结果。（3）采用透射电镜观察HL-60细胞凋亡时细胞形态及结构的变化。（4）应用原了吸收法检测细胞色素C诱导HL-60细胞凋亡时细胞内Ca²⁺浓度的变化。 结果 1．流式细胞仪检测结果：（1）不同浓度细胞色素C作用于HL-60细胞，可出现增殖、凋亡、坏死三种不同效应，浓度小于0.94μg／ml诱导增殖；浓度为 5.63μg／ml-24.38μg／ml诱导凋亡，其中最佳诱导凋亡浓度为9.38μg／ml—22.5μg／ml；浓度大于28.13μg／ml诱导坏死。（2）作用时间不同，诱导凋亡率亦不相同，其中24小时为最佳作用时间，发 论义 则胞色索〔诱导＊血俩细胞株H卜60凋1’双应的W； 生细胞凋亡的百分率最高。（3）细胞色索 C 诱导 H L－60 驯胞 凋亡的作用与细胞周期密切相关，随凋亡率升高，S 期和GZ 期细胞比例随二下降，S 期细胞比例与凋亡率二者呈显著负性 关系（r—0．718，p＜0．of）。2．片 E：DNA 分 析 全 议： 9．38ug／ml—22．sug／ml的细胞色素C什用于HL－60细胞，出现 明显的细胞凋亡梯形图象。3．细胞凋亡形态及结构的变化：细 胞色素C诱导HL－60细胞发生凋亡时，光镜下可见HL－60细胞 出现膜皱缩，外形不规则，细胞核染色质凝集，核固缩，凋亡 小体形成。透射电镜下观察见HL－60 细胞染色质固缩、碎裂、 聚集于核膜呈境界分明块状，细胞浆浓缩或裂解成质膜包绕的 碎片。4．细胞凋亡时细胞内 CaZ”浓度的变化：（l）细胞色素 C 与HL－60 细胞作用的时间不同，细胞凋亡的百分率不同， 其细胞内 caZ“的浓度亦不同，且随细胞凋亡的百分率而增高。 （二） 凋亡组细胞 ＊＊十含帚为IO．35士1．刃门OWV1)，对照乡 为 7．26 fi．0810－且g／l)，两组比 较存召显著差洋性（P＜0．of）。L。J见 细胞凋亡时，细胞内 Ca》明显升高。 结论 细胞色素C可诱导HL．60细胞发生增殖、凋亡、坏 死三种不同效应，并具浓度和时间依赖性，低浓度细胞色系C 诱导HL．60 细胞增殖，适量浓度诱导细胞凋亡，高浓度诱导细 胞坏死；作用24小时为诱导凋亡最佳时间。此结果体现了一定 的量－效、时．效关系，提示细胞凋亡和坏死的启动和调控可能 与损伤强度阈值和时间阈值有关。细胞色素C诱导HL－60凋亡 与细胞周期密切相关，S 期细胞比例与凋亡率之问呈显著负相 关。此外，细胞凋亡时伴有胞浆ca／浓度的升高．说明ca卜在 细胞凋亡的分子作用机制中起了重要的调控作用。本实验的完 成，不仅为细胞色素C在细胞凋亡中的作用提供实验依据，办 可为今后细胞色素C 有望与其它化疗药物协同提高急性髓系白 血．病的完个缓解率提供一定的理论某础。