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目的:建立TCR Vβ-Dβ1信号结合TCR删除DNA环(sjTRECs)的检测方法,通过检测TCR 23个Vβ-Dβ1 sjTRECs在脐血、正常人、髓性白血病患者外周血单个核细胞(PBMCs)、CD4~+和CD8~+T细胞中的存在特点,从而进一步了解正常人和髓性白血病患者各Vβ亚家族na(?)ve T细胞的胸腺近期输出情况,详细了解髓性白血病患者细胞免疫功能缺陷状况和后继免疫重建的能力和潜能。 方法:利用半巢式PCR分别扩增正常胸腺细胞、脐血和正常人PBMCs中的TCR 23个Vβ-Dβ1 sjTRECs,各Vβ亚家族sjTRECs的半巢式PCR产物均通过电泳及序列分析鉴定。然后采用半巢式PCR对不同浓度模板的4例胸腺、10例脐血、10例正常人、36例不同FAB分型急性髓性白血病(AML)患者和10例慢性髓性白血病(CML)患者PBMCs以及分选的10例脐血、10例正常人和10例CML患者CD4~+和CD8~+T细胞中的23个Vβ亚家族sjTRECs分别进行扩增。 结果:1) 在2×10~5和5×10~4个PBMCs水平,正常人分别可检测到约80%和60%左右Vβ-Dβ1 sjTRECs,同一细胞水平不同亚家族sjTRECs的检出率高低不同。正常人CD4~+和CD8~+T细胞的检测情况与PBMCs基本相一致。与相同细胞水平脐血单个核、CD4~+和CD8~+T细胞相比,正常人检出sjTRECs的Vβ亚家族的数量以及大多数Vβ亚家族sjTRECs的检出率均明显低于脐血。 2) 在5×10~4和1×10~4两种PBMCs水平,AML患者检出sjTRECs的Vβ亚家族数量以及大多数亚家族sjTRECs的检出率均明显低于正常水平。5×10~4个PBMCs中约可检测到20%左右Vβ亚家族sjTRECs,并且有13个亚家族检出率降低显示出统计学意义,其中Vβ10-和Vβ14-Dβ1 sjTRECs的检出率最低,而Vβ21最高。不同FAB分型AML患者间的检出差别未显示出统计学意义。36例AML患者检出siTRECs的Vβ亚家族数量差别较大(1~15个),年龄与检出的亚家族数量呈负相关,<30岁者的检出量高于≥30岁者,尤其在5×10~4水平差异有统计学意义。 3) CML患者绝大多数Vβ-Dβ1 sjTRECs在5×10~4和1×10~4个PBMCs水平均检测不到,2×10~5个PBMCs中可检测到少量,并且女性患者检出的亚家族数明显高于男性(P=0.015)。CML患者PBMCs、CD4~+和CD8~+T细胞中检出sjTRECs的Vβ亚家族数量以及各亚家族的检出率均低于相应的正常水平,甚至低于AML患者。 结论:本研究成功建立了TCR Vβ-Dβ1 sjTRECs的半定量检测方法。正常情况下,胸腺近期可以输出本实验水平可以检测到的大多数Vβ亚家族na(?)ve T细胞,但不同Vβ亚家族na(?)ve T细胞的输出水平也有差异。AML患者胸腺近期输出Vβ亚家族