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目的:喉癌是耳鼻喉-头颈外科最常见的恶性肿瘤之一。目前喉癌的治疗仍是以外科手术为主,辅以放、化疗及生物治疗。尽管手术方式不断改进,综合治疗手段不断完善,但喉癌的5年生存率仍无显著提高,局部复发及淋巴道转移为治疗失败的主要原因。因此,了解淋巴转移的机制对于喉癌的诊断、治疗具有重要的临床意义。血管内皮生长因子(VEGF)是一类与肝素结合的生长因子,VEGF-C是VEGF的一种新同源物,是目前己知的最为重要的淋巴管生成诱导因子,可以选择性地促进淋巴管增生和扩张,增强淋巴管通透性,促进肿瘤周围相关淋巴管的生长,有利于肿瘤细胞经淋巴管转移播散。VEGFR-3属于受体酪氨酸蛋白激酶家族,为淋巴内皮细胞上第一个被克隆的分子标志物,是VEGF的特异性受体,VEGF-C通过多种病理和生理途径与其受体VEGFR-2和VEGFR-3反应,刺激血管和淋巴管增生。D2-40是一种新近发现的特异性抗M2A抗原的单克隆抗体,被认为是目前最特异性的新生淋巴管内皮细胞标记物。本实验通过观察三种蛋白在喉癌中的表达,为了解喉癌淋巴道转移机制及判断预后提供新的思路。方法:材料收集自2008年1月至2009年12月于河北医科大学第四医院耳鼻咽喉-头颈外科住院行手术治疗的喉癌患者。其中喉癌组织40例、相应癌旁组织40例(距肿瘤切缘至少0.5cm),并取19例同期行手术治疗的非喉部疾病的正常喉粘膜组织做为对照。应用免疫组织化学及流式细胞术方法检测VEGF-C、VEGFR-3和D2-40在喉癌组织、癌旁组织及正常喉粘膜组织中的表达。运用SPSS13.0统计软件对数据进行统计分析。以P≤0.05为差异在统计学上有显著性意义,P≤0.01为差异在统计学上有非常显著性意义。结果:1 VEGF-C的表达1.1免疫组化法:VEGF-C在喉癌、癌旁及正常喉粘膜中均有表达,其表达强度呈下降趋势,三组相比有非常显著性差异(P<0.01)。喉癌组VEGF的表达高于癌旁组与正常组(P<0.01,P<0.01),而正常组与癌旁组相比无显著性差异(P>0.05)。VEGF-C的表达与淋巴结转移(P<0.01)、临床分期(P<0.01)、临床分型(P<0.01)有关,与病理分级、肿瘤大小、吸烟量、年龄和性别无关(P>0.05)。1.2流式细胞术:VEGF-C在喉癌组织、癌旁组织及正常粘膜中的均有表达(FI值分别为:1.4522±0.1884,1.0816±0.0853,0.9971±0.0088),三组相比有非常显著性差异(P<0.01)。喉癌组织中VEGF-C的表达量明显高于癌旁组织(P<0.01)及正常喉粘膜组织(P<0.01),而癌旁组织与正常喉粘膜相比无显著性差异(P>0.05)。在喉癌组织中,VEGF-C的表达与淋巴结转移(P<0.01)、临床分期(P<0.01)及临床分型(P<0.01)有关,与病理分级、肿瘤大小、吸烟量、年龄和性别无关(P>0.05)。2 VEGFR-3的表达2.1免疫组化法:VEGFR-3在喉癌、癌旁及正常喉粘膜中均有表达,其表达强度呈下降趋势,三组相比有非常显著性差异(P<0.01)。喉癌组VEGFR-3的表达高于癌旁组与正常组(P<0.01,P<0.01),而正常组与癌旁组相比无显著性差异(P>0.05)。VEGFR-3的表达与淋巴结转移(P<0.01)、临床分期(P<0.01)及临床分型(P<0.01)有关,与病理分级、肿瘤大小、吸烟量、年龄和性别无关(P>0.05)。2.2流式细胞术:VEGFR-3在喉癌组织、癌旁组织及正常粘膜中均有表达(FI值分别为1.4974±0.1884,1.1116±0.1385,1.00311±0.0570),三组相比有显著性差异(P<0.01)。喉癌组织中VEGFR-3的表达量明显高于癌旁组织(P<0.01)及正常喉粘膜组织(P<0.01),而癌旁组织与正常喉粘膜相比无显著性差异(P>0.05)。在喉癌组织中,VEGFR-3的表达与淋巴结转移(P<0.05)、临床分期(P<0.05)及临床分型(P<0.01)有关,与病理分级、肿瘤大小、吸烟量、年龄和性别无关(P>0.05)。3 D2-40的表达3.1免疫组化法:D2-40在喉癌组织、癌旁组织和正常粘膜组织中均有表达,其表达强度呈下降趋势,三组相比有显著性差异(P<0.01)。喉癌组高于癌旁组与正常组(P<0.01,P<0.01),而正常组与癌旁组相比无显著性差异(P>0.05)。D2-40与淋巴结转移(P<0.05)、临床分期(P<0.05)和临床分型(P<0.05)有关,与病理分级、肿瘤大小、吸烟量、年龄和性别无关(P>0.05)。3.2流式细胞术:D2-40在喉癌组织、癌旁组织及正常粘膜中均有表达(FI值分别为2.1155±0.2585,1.2049±0.1618,1.0018±0.0168),三组相比有显著性差异(P<0.01)。喉癌组织中D2-40的表达量明显高于癌旁组织(P<0.01)及正常喉粘膜组织(P<0.01),而癌旁组织与正常喉粘膜相比无显著性差异(P>0.05)。在喉癌组织中,D2-40的表达与淋巴结转移(P<0.01)、临床分期(P<0.01)及临床分型(P<0.01)有关。与病理分级、肿瘤大小、吸烟量、年龄和性别无关(P>0.05)。4喉癌组织中VEGF-C、VEGFR-3蛋白与D2-40蛋白的表达有多元线性回归关系,且均为正相关,D2-40蛋白表达随着VEGF-C和VEGFR-3蛋白增大而增大,多元线性回归方程为YD=0.753XC+0.466XR-0.430(F=9.973,P=0.001)。结论:1 VEGF-C、VEGFR-3及D2-40蛋白在喉鳞状细胞癌组织、癌旁组织及正常喉粘膜组织中均有表达。2 VEGF-C、VEGFR-3及D2-40蛋白在喉癌组织中的定量及定性表达均明显高于癌旁组织及正常喉粘膜组织,可能与喉癌的发展有关。3 VEGF-C、VEGFR-3及D2-40蛋白在喉癌组织中的表达与淋巴结转移、临床分期、临床分型有相关性;与病理分级、肿瘤大小、吸烟量、年龄和性别无关。提示三者可能与喉癌的发展及转移有关。4喉癌组织中D2-40蛋白与VEGF-C、VEGFR-3蛋白表达呈正相关。