水稻红莲型细胞质雄性不育(HL-CMS)的育性恢复受Rf5和Rf6共同控制。Rf5定位于第10号染色体,编码的蛋白RF5能与GRP162形成复合物,识别并催化atp6-orfH79转录本剪切。但Rf6定位于水稻8号染色体上,功能不十分清楚,本研究对Rf6的研究,取得了如下结果:1、根据Rf6定位信息,克隆了预测的具有PPR结构域的Rf6及rf6基因。根据Rf6和rf6序列差异性开发了区分两个基因的分子标记。含Rf6基因的材料能扩增出750 bp左右的特异条带,而含有rf6基因的材料可扩增出400 bp左右的特异条带,这一分子标记可用于恢复系的辅助选择。2、构建了Rf6的植物超表达载体,通过农杆菌介导的遗传转化YTB和YTA,通过PCR鉴定,分别获得了Rf6转YTB的阳性植株11株和转YTA阳性植株5株。3、构建了Rf6开放阅读框的原核表达载体,转入大肠杆菌BL21(DE3)中。20℃,0.3 mmol/L IPTG诱导4 h条件下,能收获较大量可溶性蛋白,经Glutathione Resin亲和层析系统获得了纯化的RF6蛋白。