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目的:本文以甘蔗(Saccharum sinense Roxb.)的叶为研究对象,首先对甘蔗叶总黄酮展开提取与纯化工艺研究及其多种品种黄酮的含量测定,同时结合药效筛选追踪,研究甘蔗叶中黄酮类化学成分,为开发具有抗肿瘤抗龋齿活性的新的药用资源提供物质基础和科学依据。 方法:本文采用L9(34)正交试验优化乙醇回流提取甘蔗叶总黄酮工艺,并考察不同极性的大孔树脂对甘蔗叶总黄酮的静态吸附量和解吸率,确定甘蔗叶总黄酮最佳提取纯化工艺。以NaNO2-Al(NO3)3-NaOH显色法考察10种蔗叶品种在不同时期总黄酮动态累积情况,以期获取不同甘蔗叶黄酮的动态变化。结合活性追踪方法,采用聚酰胺柱色谱法、葡聚糖凝胶 LH-20色谱法和重结晶法等现代分离方法和技术对甘蔗叶黄酮成分进行化学成分的分离纯化,通过理化检验、UV、IR、1H-NMR、13C-NMR和MS等方法对所得化合物进行结构鉴定。甘蔗叶黄酮类成分体外抗肿瘤活性研究,运用MTT法分别取对数生长期的细胞株 BEL7404,SK-OV-3,NCI-H460,CNE,Caco-2,Hela共六种癌细胞,以 IC50为考察指标确定其抗肿瘤活性物质。甘蔗叶黄酮类成分抗龋齿活性研究,采用二倍稀释法分别取对数生长期的变异链球菌和粘性放线菌,确定各成分的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。 结果:甘蔗叶提取总黄酮提取工艺结果表明最佳提取工艺为提取温度为70℃,提取乙醇浓度为70%,提取时间为4h,固液比为1:25,甘蔗叶总黄酮纯化AB-8大孔树脂,吸附率为57.57%,解吸率为77.26%。通过比较甘蔗叶10种品种不同采收期的总黄酮含量差异,发现总黄酮含量最高是采摘于11月的桂糖00236(23.208mg/g),其他品种相应的最佳采收期主要集中在10月到11月之间。从甘蔗叶中分离得到3个化合物,并鉴定3个化合物,分别为:5,7,4′-三羟基-3′,5′-二甲氧基黄酮即苜蓿素(tricin,SC1)、5,7,4′-三羟基黄酮-8-C-β-D-葡萄糖苷即牡荆素(vitexin,SC2)和5,7,3′,4′-四羟基黄酮-8-C-β-D-葡萄糖苷即荭草素(orientin,SC3),以上3个化合物均为首次从该植物中分离得到。通过甘蔗叶黄酮成分对多种细胞株,结果表明甘蔗叶黄酮组分均表现出一定的抑制活性,其中单体 SC1对 BEL7404,SK-OV-3,NCI-H460,CNE,Hela和Caco-2肿瘤细胞有抑制作用且存在剂量依赖性,IC50分别为55.50μg/mL、108.07μg/mL、192.90μg/mL、73.82μg/mL、121.5μg/mL和198.12μg/mL;甘蔗叶黄酮SC2对BEL7404,SK-OV-3,NCI-H460,CNE和Hela肿瘤细胞均有明显的抑制作用,IC50分别为152.43μg/mL、282.87μg/mL、276.75μg/mL、139.18μg/mL和277.52μg/mL;甘蔗叶黄酮SC3对BEL7404和Hela有明显的抑制作用,IC50为176.68μg/mL和230.14μg/mL。通过研究黄酮成分对变异链球菌和粘性放线菌的作用结果表明,总黄酮95%乙醇洗脱流份(S5)和0.1%乙酸醇溶液洗脱流份(S6)对变异链球菌和粘性放线菌的最小抑菌浓度均为1mg/mL;S6对变异链球菌最小杀菌浓度为4mg/mL。 结论:甘蔗叶总黄酮提取工艺中发现乙醇浓度影响最大,提取温度次之;纯化工艺中AB-8大孔树脂吸附和解吸率优于其他3种大孔树脂。通过考察10种甘蔗叶品种不同采收期的总黄酮动态累积情况可知,总黄酮含量最高的是采摘于11月的桂糖00236。从甘蔗叶总黄酮中首次分离得到3个化合物:苜蓿素(tricin)、牡荆素(vitexin)和荭草素(orientin)。甘蔗叶黄酮类成分抗肿瘤筛选结果发现化合物 SC1对BEL7404,SK-OV-3,NCI-H460,CNE,Hela和Caco-2肿瘤细胞具有一定的体外抑制活性;化合物SC2对BEL7404,SK-OV-3,NCI-H460,CNE和Hela肿瘤细胞具有一定的体外抑制活性;化合物SC3对BEL7404和Hela具有一定的体外抑制活性。研究发现甘蔗叶黄酮成分中有多种有效抑菌成分,对口腔常见致龋齿菌有抑制作用,其中S5和S6对变异链球菌和粘性放线菌抑菌作用,与茶多酚效果相当;对变异链球菌杀菌效果,S6与茶多酚相当。