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目的:通过构建Vimentin基因表达上调和下调的鼻咽癌细胞系,检测Vimentin基因表达上调或下调后鼻咽癌细胞中Annexin A1和S100A9蛋白的表达,同时观察Vimentin基因表达上调或下调后鼻咽癌细胞体外侵袭迁移能力等生物学行为的变化情况。初步探讨Vimentin通过调控Annexin A1和S100A9的表达对鼻咽癌细胞体外侵袭迁移能力的影响,为鼻咽癌发生远处转移的分子机制提供实验室资料。方法:1.构建Vimentin过表达质粒载体和Vimentin干扰载体;2.采用基因脂质体转染技术,将Vimentin过表达质粒导入Vimentin低表达、低转移潜能的6-10B鼻咽癌细胞系中,建立Vimentin基因高表达的6-10B-Vim鼻咽癌细胞系和空载体对照细胞系6-10B-Vec(Vector);3.运用小分子干扰RNA(siRNA)技术,将siRNA导入Vimentin高表达、高转移潜能的5-8F鼻咽癌细胞系中,建立Vimentin基因表达下调的5-8F-si-vim鼻咽癌细胞系和空载体对照细胞系5-8FNC(Negetive Control);4.通过Q-PCR和Western blot实验分别检测过表达Vimentin质粒载体转染组6-10B-Vim和干扰载体转染组5-8F-si-vim及各相应对照组中Vimentin的mRNA和蛋白表达情况,确认转染效率;5.通过Western blot实验检测各鼻咽癌细胞系中Vimentin基因表达上调或下调时,Annexin A1和S100A9的表达变化情况;6.通过划痕实验和Transwell小室实验检测Vimentin基因表达上调和下调后对鼻咽癌细胞系体外侵袭迁移能力的影响。结果:1.成功构建Vimentin过表达质粒载体和Vimentin干扰载体;2.瞬时转染Vimentin过表达基因后,通过Q-PCR和Western blot实验分别检测过表达质粒载体转染组6-10B-Vim细胞和空载体对照组6-10B-Vec细胞中Vimentin的mRNA和蛋白的表达情况,Q-PCR结果显示:与对照组细胞相比,过表达Vimentin质粒载体转染组6-10B-Vim细胞中,Vimentin mRNA表达水平明显上调(P<0.001);Western blot结果显示:与对照组细胞相比,6-10B-Vim细胞中Vimentin蛋白水平明显上调(P<0.001);3.瞬时转染Vimentin siRNA干扰基因后,通过Q-PCR和Western blot实验分别检测干扰载体转染组5-8F-si-Vim细胞及其空载体对照组5-8F-NC细胞中Vimentin的mRNA和蛋白的表达情况。Q-PCR结果显示:与对照组细胞相比,干扰载体转染组5-8F-si-Vim细胞中,Vimentin mRNA表达水平明显下调(P<0.001);Western blot结果显示:与对照组细胞相比,5-8F-si-Vim细胞中Vimentin蛋白水平明显下调(P<0.001);4.Western blot实验检测Vimentin基因表达上调和下调后6-10BVim、6-10B-Vec、5-8F-si-Vim及5-8F-NC四组鼻咽癌细胞中Annexin A1和S100A9蛋白的表达情况,结果显示:Vimentin表达上调后,S100A9的表达水平明显上调(P<0.05),而Annexin A1的表达水平明显下调(P<0.05);Vimentin表达下调后,S100A9的表达水平明显下调(P<0.05),而Annexin A1的表达水平明显上调(P<0.05);5.Transwell小室和划痕实验检测Vimentin基因表达上调和下调后鼻咽癌细胞体外侵袭迁移能力,结果显示:Vimentin表达水平上调后,鼻咽癌细胞体外侵袭迁移能力明显增强(P<0.01),而Vimentin表达下调后,鼻咽癌细胞体外侵袭迁移能力明显减弱(P<0.01)。结论:1.鼻咽癌细胞中Vimentin表达改变能够影响Annexin A1和S100A9蛋白的表达。2.鼻咽癌细胞系内过表达Vimentin可增加其侵袭和迁移能力。3.Vimentin可能通过调控Annexin A1和S100A9蛋白的表达,影响鼻咽癌细胞的体外侵袭和迁移能力。