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IL—15是一种新近发现的细胞因子，具有同IL—2相似的生物学功能。IL—15对T细胞、NK细胞和B细胞均能够产生促增殖促分化的作用，并能够诱导淋巴细胞产生IFN-γ、TNF-α。在胸腺微环境和骨髓微环境中，IL—15对NK前体细胞的发育、分化、增殖及成熟具有重要的作用。IL—15通过增加CD18分子和穿孔素分子的表达而诱导较强的NK／LAK／CTL活性，在体外同等的条件下，其诱导的细胞毒效应比IL—2诱导的高2～3倍。动物实验结果显示，在体内，IL—15诱导的特异性杀伤效应只有IL—2的1／3，但是它诱导的NK杀伤活性比IL—2诱导的高3～4倍；而且IL—15产生的血管渗漏综合症等毒副作用时所需的剂量是IL—2的6倍，其治疗系数至少比IL—2高三倍以上。上述的这些结果表明，IL—15具有明显的抗肿瘤效应。因此，IL—15基因转染的肿瘤细胞可望作为肿瘤疫苗发挥平抗肿瘤作用。 近年来，细胞因子基因治疗肿瘤的研究取得了很大的进展，动物实验研究结果证实，细胞因子基因转染的肿瘤细胞疫苗可以大大提高肿瘤细胞的免疫原性，诱发机体产生局部和／或全身的抗肿瘤免疫应答。许多细胞因子基因(包括IL—2、IL—4、IL—6、IL—7、IL—12、GM—CSF、TNF-α、IFN-γ)被RAC／FDA批准试用于临床，进入Ⅰ、Ⅱ期临床前研究。目前，国内外有关人IL—15基因转染肿瘤细胞诱导抗肿瘤生长及转移的研究工作尚未见报道。本研究在人IL—15基因克隆、表达及其基因转染肿瘤细胞诱导抗肿瘤作用方面作了探讨，以期为IL—15的深入理论研究和临床应用提供依据。 本研究采用逆转录PCR方法，从脂多糖刺激活化的人外周血粘附性单核细胞中克隆了人IL—15cDNA，经序列分析证实，它除了包括编码IL—15成熟蛋白及信号肽的全部核苷酸之外，还包括5’非翻译区及3’非翻译区的部分核苷酸，其序列与文献报道一致。在此基础上再次使用PCR方法扩增出编码IL—15成熟蛋白的cDNA，将其于BamH I位点正向插入原核表达载体pGEX—2T，完成了重组质粒pGEX—2T—IL—15的构建。然后将pGEX—2T—IL—15转化大肠杆菌JM109，在1mM IPTG的诱导下表达了GST—IL—15融合蛋白，SDS—PAGE分析显示其分子量大约为44Kd，其表达量约占菌体总蛋白的8·8％，Western Blot证实，它能够与抗IL—15的多克隆抗体发生特异性结合。至此，我们完成了人IL—15基因的克隆并在大肠杆菌中获得了表达。