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羊口疮，又叫羊传染性脓疱皮炎，是由羊口疮病毒引起的绵羊和山羊的急性接触传染性的病毒病。羊口疮在世界范围内流行，常发生于夏末与秋冬季节，在我国新疆、青海、云南、山东、四川、陕西等十多个省份都有相应的报道，给我国的养羊业造成了巨大的经济损失。在流行地区，羊口疮发病率高达80%~90%。本文分离鉴定了陕西杨凌和云南泸西地区羊口疮病毒的流行毒株，通过微量细胞交叉中和试验鉴定了两株羊口疮病毒在中和水平的抗原差异性，同时将两株病毒在犊牛睾丸原代细胞上连续传代至第86代，分别把第86代病毒划痕接种于3只30~45日龄的羔羊，检测病毒弱化效果。试验结果如下：1.羊口疮病毒杨凌和泸西野毒株的分离与鉴定第5代病毒能引起明显的细胞病变，其中第5代杨凌株病毒滴度为107.66TCID50/mL，泸西株病毒滴度为108.2TCID50/mL；杨凌株病毒PCR扩增片段与设计引物的序列的相似度分别为96.57%和96.43%，泸西株病毒与设计引物的序列相似度分别为97.75%，96.33%，两株病毒B2L基因扩增片段的相似性为96.93%，F1L基因扩增片段的相似性为96.90%，确定为羊口疮病毒的相应基因片段。结果表明，本研究获得了羊口疮病毒杨凌与泸西野毒株。2.羊口疮病毒杨凌野毒株与泸西野毒株的微量血清交叉中和试验分别用所分离的羊口疮病毒杨凌野毒株和泸西野毒株免疫四次家兔制备免疫血清，所制备的免疫血清用双向琼脂扩散试验测得效价为1:4和1:8；间接ELISA测得效价分别为1:100000和1:1000000。运用固定病毒-稀释血清法进行微量细胞中和试验，测得羊口疮病毒杨凌株免疫血清与羊口疮病毒杨凌株、羊口疮病毒泸西株的中和抗体效价分别为1:214、1:186，羊口疮病毒泸西株免疫血清与羊口疮病毒杨凌株、羊口疮病毒泸西株的中和抗体效价分别为1:224、1:316。运用R=r1.r2计算出两株羊口疮病毒的抗原比为1.27，表明试验研究中所分离的羊口疮病毒杨凌野毒株株和泸西野毒株之间中和抗原差异不明显。3.羊口疮病毒杨凌野毒株与泸西野毒株毒力弱化试验将分离到的羊口疮病毒杨凌野毒株和泸西野毒株分别在犊牛睾丸原代细胞上连续传代至第86代，测定第86代的病毒滴度。测得P86羊口疮病毒杨凌株滴度为106.92TCID50/ml，P86羊口疮病毒泸西株滴度为107.31TCID50/ml，分别划痕接种3只1月龄的羔羊，每只羔羊接种1mL，逐日观察接种部位，结果显示P86羊口疮病毒杨凌株羔羊接种部位及口唇内外均未出现红斑、水泡、脓胞、溃疡等病变，第3d划痕部位完全痊愈。P86羊口疮病毒泸西株羔羊接种部位出现米粒大小的红斑，但也在安全范围之内。羊在体试验结果表明，本研究制备的P86羊口疮病毒杨凌和泸西株毒力减弱，不具有致病性。以上结果表明，本研究成功分离鉴定了羊口疮病毒杨凌株与泸西株，两株病毒在中和抗原水平差异不明显，并成功获得了两株病毒的弱毒株。