【摘 要】
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erbB-2，又称HER2／neu，是酪氨酸激酶癌基因家族中的一员，编码跨膜受体样的磷酸化糖蛋白(185kD，简称P185)。约25％的乳腺癌、卵巢癌等恶性肿瘤中出现erbB-2基因的突变或过度表达。为了能够得到针对P185蛋白的单链抗体，本课题进行了以下实验研究：首先，运用生物信息学分析手段和检索已报导的研究成果，认定P185蛋白胞外近膜区部分是一个抗肿瘤治疗靶点，故确定该段基因作为要表达的目的
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erbB-2，又称HER2／neu，是酪氨酸激酶癌基因家族中的一员，编码跨膜受体样的磷酸化糖蛋白(185kD，简称P185)。约25％的乳腺癌、卵巢癌等恶性肿瘤中出现erbB-2基因的突变或过度表达。为了能够得到针对P185蛋白的单链抗体，本课题进行了以下实验研究：
首先，运用生物信息学分析手段和检索已报导的研究成果，认定P185蛋白胞外近膜区部分是一个抗肿瘤治疗靶点，故确定该段基因作为要表达的目的抗原。从乳腺癌细胞系sk-br-3中抽提出总RNA，扩增出其胞外近膜区部分aa 505-625基因，构建原核表达载体，并实现该基因在大肠杆菌中的高效表达，表达量占菌体胞内可溶性蛋白总量的30％。通过金属螯合层析，回收到电泳纯级别的目的蛋白。
其次，使用该抗原以固相法对大容量噬菌体抗体库进行3轮筛选，借助EUSA法鉴定出多株阳性克隆，并在蛋白质水平上鉴定其特异性，并比较其相对亲和力。
最后，将2株较有价值的重组子的单链抗体部分克隆到带e-tag标签蛋白的原核表达载体pTIG-e中，为下一步在细胞水平和组织水平上鉴定其亲和力和特异性研究奠定了基础。
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