中药复方优精颗粒治疗精子形态异常的机制研究

来源 :南京中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jinglwwb33
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目的:不育症是男科学研究的主要内容之一,精子畸形与男性不育密切相关。本次研究采用甲基磺酸甲酯(methyl methanesulphonate,MMS)制造精子形态异常大鼠模型。研究优精颗粒对模型大鼠精子形态、密度、活率的影响,研究相关基因、蛋白的表达;并从内分泌、氧化应激角度探讨其作用机制。  方法:SD大鼠48只,随机分正常对照组、MMS组、优精颗粒低、中、高剂量组、维生素E组共6组,每组8只。除正常组外,其余40只大鼠均先用MMS给大鼠灌胃,连续5天,制造出精子形态异常大鼠模型。之后给予维生素E及优精颗粒(分低、中、高剂量给药)治疗,连续48天,与此同时,正常组大鼠给予等量的大鼠饮用水灌胃。第49天,水合氯醛腹腔注射麻醉,摘取大鼠睾丸和附睾,心尖部取血备用。  然后进行以下内容的检测:  1,检测各组大鼠附睾的精子浓度、活率和精子形态;  2,取一侧睾丸进行石蜡切片,在光学显微镜下观察各组大鼠睾丸组织的形态学改变;  3,检测各组大鼠血清睾酮水平;  4,检测各组大鼠血清氧化应激指标;  5,用RT-PCR方法检测各组大鼠睾丸组织中生殖相关(精子发生、精子形态)基因的表达差异;  6,用免疫组化方法检测Vasa、Plzf、 Sycp3、Sox9在各组大鼠睾丸组织中的表达。  结果:与正常对照组相比: MMS组大鼠附睾的精子浓度与活率明显下降,精子畸形率明显升高;光镜下生精小管退化,各级生精细胞数量减少、层次不清晰;血清睾酮水平明显降低;血清氧化指标(超氧阴离子、羟基自由基)明显升高,抗氧化指标(超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶)明显降低;RT-PCR显示,睾丸组织中生殖细胞细胞相关基因Vasa、Dazl表达明显降低,精子细胞阶段相关蛋白Acrosin的表达也明显降低;免疫组化显示,睾丸组织中生殖细胞相关基因Vasa表达的量也明显减少。  与MMS组比较:优精颗粒低、中、高剂量组大鼠附睾的精子浓度与活率均显著增加,精子畸形率显著降低。在与MMS组比较中:维生素E组、及优精颗粒组在精子浓度、活率、精子畸形率、光镜下睾丸曲细精管组织、氧化应激指标、睾丸组织中Vasa、Dazl、Acrosin的表达等各方面均有显著差异。  与VE组比较:优精颗粒组大鼠在精子活率、精子畸形率、光镜下曲细精管组织、血清睾酮、睾丸组织中Vasa、Dazl、Acrosin的表达的量这几个方面均占明显优势。  结论:MMS可以造成精子形态异常的大鼠模型。MMS对于整个生精过程中的后期(即精细胞形成及精子成熟过程)有一定的影响,从而导致畸形精子增加,同时引起大鼠精子数量、活率等降低,而VE对于其有一定的修复功能。  优精颗粒对于MMS致畸的修复能力要优于VE,从而可以更好地提高(或降低)各项指标,且无论VE或者优精颗粒,其对血睾屏障都没有影响,会顺利通过血睾屏障而发挥作用。  优精颗粒可以明显提高模型大鼠生殖细胞相关基因Vasa、Dazl的表达,明显提高与精细胞阶段相关基因Acrosin的表达。我们推测,优精颗粒的作用机制可能是通过上调MMS大鼠睾丸组织Vasa、Dazl、Acrosin表达,改善精子形态,以及影响精子的发育、成形以及活率等参数。
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