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背景与目的:白内障超声乳化摘除术是治疗白内障的最主要有效的方法,而后发性白内障(亦称后囊膜浑浊,posterior capsular opacification,PCO)是现代白内障手术最常见的术后远期并发症,其主要机制是由于部分残余的晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LECs)在一些生长因子和细胞因子的刺激下迅速生长,细胞间的粘附性下降,上皮细胞向间充质细胞转分化,沿囊壁迁移,并逐渐覆盖后囊膜而造成。研究表明转化生长因子-β(TGF-β)在白内障术后房水中的含量有所升高,被认为是晶状体上皮细胞发生转分化及病理性纤维化的主要因素。有研究表明TGF-β2可通过激活ERK通路诱导晶状体上皮细胞EMT的发生。本论文利用HLEC-B3细胞系体外细胞模型,着重研究TGF-β诱导LECs迁移和EMT的影响因素,以及NSAIDs抗炎药溴芬酸钠在LECs转分化过程中发挥的作用及其作用机理。方法:将体外培养的人晶状体上皮细胞(HLEC-B3)分为10ng/mlTGF-β2刺激组和无TGF-β2刺激的对照组,在相应处理后,用实时荧光定量PCR和Western Blot试验检测纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)及SnailmRNA和蛋白的表达水平。同时,经TGF-β2刺激后48h,用细胞划痕试验检测细胞的迁移能力,在光学显微镜下观察细胞形态变化。在TGF-β2刺激前24h予以不同浓度溴芬酸钠预处理,然后用实时荧光定量PCR、Western Blot试验、细胞免疫荧光试验以及细胞划痕试验检测细胞EMT相关基因表达的改变以及细胞迁移能力的改变。为探究溴芬酸钠在抑制细胞转分化过程中可能的作用机理,将细胞予以不同浓度溴芬酸钠预处理并在TGF-β2刺激后用Western Blot试验检测Smad、EKR、GSK-3β的磷酸化水平。预先加入MAPK/ERK激酶(MEK)的特异性抑制剂U0126和GSK-3特异性抑制剂CHIR-99021后检测FN、MMP2及Snail的表达,以验证ERK/GSK-3β信号通路在HLEC-B3 EMT过程中的调控作用。为进一步研究ERK/GSK-3β信号通路对FN和MMP2表达调控的机制,通过转染Snail siRNA后检测FN、MMP2的改变以判断Snail在信号通路中所发挥的作用。将细胞转染Snail siRNA后予以溴芬酸钠处理,用实时荧光定量PCR和Westem Blot试验检测FN和MMP2 mRNA及蛋白的表达水平,以验证溴芬酸钠对细胞EMT的抑制作用与Snail的关系。结果:TGF-β2可诱导HLEC-B3细胞的迁移以及FN、MMP2及Snail的表达上调。应用溴芬酸钠预处理可以有效抑制TGF-β2诱导的细胞迁移和FN、MMP2及Snail的高表达。TGF-β2可通过激活ERK/GSK-3β信号通路上调FN、MMP2及Snail的表达。并且,溴芬酸钠可有效抑制TGF-β2诱导的HLEC-B3细胞ERK/GSK-3β信号通路的激活。转染Snail siRNA可抑制TGF-β2诱导的FN和MMP2的高表达,同时,Snail基因沉默可有效限制溴芬酸钠对TGF-β2诱导的FN和MMP2高表达的抑制效应。结论:TGF-β2可以通过激活ERK/GSK-3β/Snail信号通路诱导HLEC-B3的迁移和EMT;溴芬酸钠可通过阻断ERK/GSK-3β/Snail信号通路实现对HLEC-B3的迁移和EMT的抑制。