胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumonia,APP)是猪的传染性胸膜肺炎的病原菌,能引起各个年龄的猪发生急性和慢性的感染,主要病变是肺出血、坏死和纤维素性渗出.该研究主要是针对以上情况,旨在建立一种特异、敏感、能对所有血清型APP做出检测的血清学检测方法,同时,研制一种具有交叉保护力的安全高效的疫苗,最终能全面预防和控制该病.APP共产生三种毒素,每种血清型的APP可产生其中的一种或两种,ApxII在除10型外所有的血清型中都可产生.该研究的内容之一是对5型APP的apxIICA基因进行克隆、测序和原核表达.Apx毒素蛋白的激活需要apxIIC基因的产物.采用分子生物学的方法,使细菌中的apxIIC基因失活,这样的菌株可以持续地表达无活性的Apx毒素蛋白而不对动物致病,保护效果优于灭活苗,能提供交叉保护力.该研究就是基于此而构建了转移载体pSKPG.首先是PCR扩增了apxIIC基因以及该基因上游2000bp和下游约900bp共3.4kb的DNA片段,克隆到pBluscriptIISK+载体中,并将绿色荧光蛋白基因gfp插入到apxIIC中间,使其在失活的同时也带上了选择标记.这一转换载体为进一步地构建APP的apxIIC基因失活的基因工程疫苗打下了基础.