第一部分多能蛋白聚糖在人卵泡中的表达目的:多能蛋白聚糖(versican)在维持卵泡结构完整、卵泡发育、卵冠丘复合物扩张及排卵中起重要作用。本研究目的是明确versican在人卵泡细胞中表达的亚型类别,以及各种亚型的表达水平。方法:收集临床试管婴儿患者的大卵泡(≥18mm)、小卵泡(≤10mm)的卵泡液,分离卵泡壁层颗粒细胞(以下简称为颗粒细胞),一部分细胞用于提取总RNA,行实时荧光定量PCR(q RT-PCR);一部分细胞用于提取蛋白,行western blot实验。同时收集ICSI患者来源的卵丘颗粒细胞(以下均称为卵丘细胞),分别行qRT-PCR和western blot实验。结果:qRT-PCR结果显示,大卵泡和小卵泡颗粒细胞和卵丘细胞均表达versican的V0、V1、V2和V3四种亚型mRNA。在卵丘细胞和大卵泡颗粒细胞中V1表达均高于V0、V2和V3(P<0.05);卵丘细胞中V0和V2的表达量仅次于V1,而V3含量最低;大卵泡颗粒细胞的V2表达水平高于V0和V3(P<0.05),V0和V3表达量无统计学差异(P>0.05);在小卵泡颗粒细胞中,V2 m RNA表达量分别高于V0和V3(P<0.05),V1表达量高于V3(P<0.05),V2与V1、V1与V0、V0与V3表达量的差异均无统计学意义。V0和V1 mRNA在卵丘细胞中的表达量分别高于在大卵泡和小卵泡颗粒细胞中的量(P<0.05),而在大、小卵泡颗粒细胞中的表达量均无统计学差异;V2在卵丘细胞中表达量高于大卵泡颗粒细胞(P<0.05),但V2在大卵泡颗粒细胞与小卵泡颗粒细胞、卵丘细胞与小卵泡颗粒细胞中表达量均无统计学差异;V3在大卵泡颗粒细胞中表达量高于卵丘细胞和小卵泡颗粒细胞(P<0.05),在卵丘细胞和小卵泡颗粒细胞中表达量无统计学差异。Western blot结果显示,卵泡颗粒细胞主要表达V1、V2和V3蛋白亚型,V0亚型的条带均很弱,而卵丘细胞表达V0、V1、V2和V3四种蛋白亚型。在卵丘细胞中,V2和V3蛋白的表达量均高于V0和V1(P<0.05),而V2与V3、V0与V1表达量的差异均无统计学意义;在小卵泡颗粒细胞中,V1、V2和V3的表达均高于V0(P<0.05),而V1、V2和V3两两之间表达量的差异均无统计学意义;在大卵泡颗粒细胞中,V1、V2和V3的表达均高于V0(P<0.05),但V1、V2和V3两两之间表达量的差异均无统计学意义。V0、V2和V3蛋白在卵丘细胞的表达量均明显高于其在大卵泡和小卵泡颗粒细胞中的量(P<0.05),而在大卵泡和小卵泡颗粒细胞中表达量的差异均无统计学意义。V1蛋白在卵丘细胞中的表达量高于小卵泡颗粒细胞(P<0.05),而在大卵泡和小卵泡颗粒细胞、卵丘细胞和大卵泡颗粒细胞间的表达量均无统计学差异。大小卵泡的卵泡液中均主要存在V2和V3两种蛋白亚型。结论:Versican的四种亚型mRNA和蛋白在人卵泡颗粒细胞和卵丘细胞均有表达。其中,卵丘细胞是versican的主要表达细胞,V0、V1、V2的mRNA和蛋白主要由卵丘细胞表达。而人卵泡液中主要存在V2和V3两种亚型蛋白。Versican亚型在小卵泡和大卵泡颗粒细胞中的表达变化可能与其在卵泡发育过程中的功能变化有关。第二部分卵泡液中多能蛋白聚糖的检测及临床意义目的:明确大卵泡液中versican含量与临床妊娠结局的关系;确定大卵泡液中versican含量的可能影响因素,即研究不同促排卵方案对卵泡液versican量的影响,多囊卵巢综合症(PCOS)、子宫内膜异位症、卵巢反应不良(poor ovarian response,POR)等状态是否影响卵泡液中versican含量,以及患者年龄、基础FSH、卵泡液雌二醇(E2)和孕酮(P)、HCG日血清E2和P等与大卵泡液中versican含量的相关性。方法:共收集327份大卵泡液,ELISA检测卵泡液中versican含量,放射免疫试验检测卵泡液E2(180份)和P(162份)含量。收集患者临床信息并随访妊娠结局,确定大卵泡液中versican含量与妊娠结局的关系,并了解卵泡液中versican含量的影响因素,包括患者年龄、基础FSH、促排卵方案、内分泌疾病、卵泡液中E2和P的含量等。结果:获得妊娠的临床妊娠组为223例,未妊娠组为98例,妊娠组中已获得活胎分娩的活产组159例,流产35例,继续妊娠28例。妊娠组卵泡液中versican含量为1799.00±956.01 pg/ml,未妊娠组的含量为1900.55±1040.10 pg/ml,两者间差异无统计学意义;活产组卵泡液中versican含量(1861.09±1004.19 pg/ml)与流产组(1769.89±897.56 pg/ml)间的差异无统计学意义(P>0.05)。应用长方案患者组194例,超长方案组49例,拮抗剂方案组75例。长方案组卵泡液中versican含量(1989.46±1006.26 pg/ml)显著高于拮抗剂方案组(1398.89±930.46 pg/ml)(P<0.001),超长方案组卵泡液中versican含量(1793.78±920.77pg/ml)也高于拮抗剂组(P=0.028),而在长方案组与超长方案组间无统计学差异。PCOS患者组34例、内异症患者组40例、POR患者组28例和对照组208例。PCOS患者组、内异症组和POR患者组卵泡液versican含量与对照组间的差异均无统计学意义。卵泡液versican含量与卵泡液E2以及HCG日E2含量正相关,但与患者年龄、基础FSH、卵泡液P和HCG日P均无相关性。结论:大卵泡液中versican含量与试管婴儿患者妊娠结局无关。长方案、超长方案和拮抗剂三种促排卵方案间卵泡液中versican含量存在明显差异,提示不同的用药方案对卵泡细胞,包括颗粒细胞和卵丘细胞的分泌活动产生了显著不同的影响。而且卵泡液中versican的含量与卵泡液和血清中雌二醇的含量正相关,因此,卵泡液中versican的含量可能也是反映卵泡细胞功能状态的一个指标。