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猪伪狂犬病(pseudorabies,PR)是由猪伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)引起的一种多种动物共患的、急性接触性传染病,主要症状为新生仔猪感染后出现神经症状、死亡等,妊娠母猪感染PRV后可引起流产、死胎、木乃伊胎及呼吸系统症状,长期以来严重制约着国内外养猪业的发展。自20世纪90年代Bartha-K61疫苗普遍应用后,PR的疫情得到了较好的控制,但自2011年下半年以来,不断有免疫疫苗的猪场发生PR的报道。本研究对山东省部分地区病料样品进行了病原学、血清学检测,并分析了几株野毒株的生物学特性,探究了分离毒株的主要毒力基因遗传进化分析及致病力情况,以揭示山东省这些地区PR的流行情况。本研究对2018上半年到2019下半年本实验室收到的山东省不同地区猪场的病原检测样品86份和血清检测样品348份,分别做了致病基因病原学检测和血清学检测,结果表明,86份病料检测样品中PRV核酸呈阳性的有7份,阳性率为8.14%,结果较前几年报道的山东省PR的阳性率偏低,说明山东省近两年的PR的防控措施略有成效,各地养殖场已经更加重视PR的防控,注重科学养猪。用ELISA试剂盒对送检的血清检测样品进行的g E、g B抗体检测结果显示,g E抗体检测阳性率为22.13%,g B抗体检测阳性率为93.68%。g E抗体检测结果表明山东省猪场仍存在部分野毒感染,g B抗体检测结果说明山东省猪场的疫苗免疫覆盖率比较理想。为了进一步了解山东省PRV流行株的情况,选取其中3个不同地方的核酸阳性病料,通过细胞接种、IFA免疫荧光试验进行了病毒分离,对3株病毒的g E、g B、TK基因进行遗传变异分析,并将3株病毒接种BALB/c小鼠,对毒株致病性进行了初步测定。结果显示,3份病毒接种BHK-21细胞后24h左右细胞开始表现典型的CPE,即感染细胞变性圆缩,并可见合胞体,细胞逐步死亡脱落。IFA结果显示,实验组细胞与空白对照组细胞相比,荧光下可明显看到荧光标记的细胞,白光中可发现细胞发生了明显的突变,而对照组无荧光也无细胞突变,表明成功分离到3株PRV毒株。小鼠致病性试验发现接种毒株的小鼠10h左右出现瘙痒,不断舔撕鼻子,鼻部周围脱毛严重,继而出现神经症状,在接种72h后陆续出现死亡。其中,攻毒分离株SD1803株组的小鼠最早出现死亡,之后攻毒分离株SD1801株组的小鼠开始死亡,攻毒分离株SD1802株组的小鼠最晚出现死亡,而空白对照组小鼠无临床病症无死亡。3株分离株的毒力略有不同,但均可致小鼠死亡,说明分离的3株病毒都具有较强的毒力。序列分析表明,这3株病毒均为PRV变异毒株,遗传变异分析发现g E基因突变最大,g B、TK基因较g E基因相对稳定,g E基因遗传变异与分离年代关系最大,其次与分离地点也有一定联系,g B基因同源性与分离地点有关,TK基因主要与分离年代有关。