基于毛细管酶微型反应器的酶反应动力学研究和应用

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毛细管电泳作为近年来发展最快的一种分离分析新技术,以其分离效率高,快速,样品用量少,操作模式多等特点,正广泛的渗透到许多领域,在分离分析方面具有非常重要的作用和广阔的应用前景。本论文工作通过共价键合将酶固定于毛细管内壁或磁珠表面,制备了两种新型的双酶固定毛细管微反应器,利用毛细管电泳,研究了双酶催化反应。制备的毛细管酶微反应器对底物的检测具有很好的专一性,检测限低,可用于生物和食品实际样品中微量物质的精确测定。本论文的研究工作主要集中在以下几个部分:(1)将谷氨酸脱氢酶(GDH)和谷丙转氨酶(GPT)共价键合在毛细管内壁,制备了一种新型的双酶固定毛细管微反应器,利用不同的光谱技术对其进行表征,并用于痕量谷氨酸的精确测定。(2)结合GDH-GPT双酶固定毛细管微反应器和亲和毛细管电泳,研究了谷氨酸双酶催化反应,测定了反应的米氏常数Km。在谷氨酸浓度为0-100?M范围内该双酶微反应器呈良好的线性响应(R2为0.9990),对谷氨酸的检测具有很好的专一性,检测限达到0.15?M,可用于生物和食品样品中谷氨酸的测定。(3)将乙醇脱氢酶(ADH)和乳酸脱氢酶(LDH)共价键合在磁珠表面,将磁珠用磁铁固定在毛细管内合适位置,制备成了一种新型的毛细管磁珠固定酶微反应器。(4)利用ADH-LDH磁珠微反应器,研究了分别以乙醛和丙酮酸钠为底物的酶反应并达到分离,测定了反应的米氏常数Km。该方法成功用于6种啤酒中有机酸的测定。
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