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1目的在中医基础理论“肺主治节”的指导下,通过动物实验研究慢性阻塞性肺疾病发生“肺气虚失治节”与缺氧导致肺血管收缩之间的关系,分析和进一步总结慢性阻塞性肺疾病痰瘀阻肺证的中医学病机学内容。通过动物实验并结合国内外学者造慢性阻塞性肺疾病大鼠模型的方法,建立了慢阻肺痰瘀阻肺证的病证结合的模型大鼠,并应用院内制剂中药复方芪白平肺胶囊进行药物干预达益气化痰祛瘀之效,从动物实验角度系统观察COPD痰瘀阻肺证模型大鼠实验前后肺功能、血流动力学、血清细胞因子、肺动脉和组织的相关蛋白如NF-kB、及ETA受体和ETB受体mRNA水平变化与肺血管收缩关系。通过以芪白平肺胶囊有效干预实现治节重建,抑制肺血管收缩,降低肺动脉高压,从而探讨芪白平肺胶囊干预COPD肺血管收缩的起效途径和作用靶点。2方法2.1理论研究系统搜集整理古今肺胀之痰瘀阻肺证(COPD痰瘀阻肺证)相关文献,筛选和总结慢性阻塞性肺疾病痰瘀阻肺证发病机制的国内外研究现状,初步探讨中药复方芪白平肺胶囊预防和治疗慢性阻塞性肺疾病导致低氧性肺血管收缩与重构的起效途径和作用靶点,以揭示中药复方芪白平肺胶囊截断和逆转慢性阻塞性肺疾病痰瘀阻肺证病程的相关作用机理,进一步丰富慢性阻塞性肺疾病的中医药防治学理论基础。2.2实验研究将大鼠随机分组为正常组(60只)、模型组(60只)、尼可地尔预防组(40只),芪白平肺胶囊预防组(40只)、尼可地尔治疗组(40只)芪白平肺胶囊治疗组(40只)。参照李泽庚、肖诗亮造模方法建立COPD痰瘀阻肺证的动物模型。从开始实验的第一天,就对各组COPD痰瘀阻肺证大鼠除正常组之外的按上述方法建立模型,每日造模复制结束后予模型大鼠灌胃。模型组和正常组每日连续生理盐水灌胃10ml/kg,予四周末、八周末、十二周末分别取材20只。预防组在造模同时进行药物干预,灌胃4周后取材20只大鼠,剩下20只停止灌胃再正常喂养4周后取材(实验第8周末取材),治疗组在造模成功后继续进行药物干预,灌胃4周后(实验第8周末取材)取材20只大鼠,剩下20只停止灌胃再正常喂养4周后取材(实验第12周末取材)。灌胃药物剂量：芪白平肺胶囊药液10 mL/kg(每毫升含芪白平肺胶囊内容物50 mg,相当于临床剂量7倍),尼可地尔10mL/kg(每毫升含尼可地尔0.3 mg,相当于临床剂量7倍)。取内容物药粉用生理盐水配成所需浓度的混悬液,给药容量均为10mL/kg。观察慢阻肺痰瘀阻肺证大鼠肺功能、血流动力学的变化、血清细胞因子的变化、肺组织核转录因子-KB蛋白含量的变化以及肺组织ETA受体和ETB受体mRNA的转录水平的变化。所有实验数据用SPSS17.0软件进行统计学分析。3结果3.1理论研究结果肺主治节的内涵高度概括了肺的主要生理功能。达到稳定和协调的自身内环境依赖于肺脏的治理和调节。达到全身上下气、血、水的升降出入平衡的目的。导致慢阻肺痰瘀阻肺证发生的主要机理就是肺失治节；抗炎和减缓气道重塑的进程就相当于肺的治节重建的过程,可以通过多种途径干预肺血管收缩及结构重建,保护血管内皮细胞,抑制肺血管收缩,从而改善右心功能和肺功能,达到降低肺血管阻力和肺动脉高压的作用。本论文通过理论研究明确慢性阻塞性肺疾病痰瘀阻肺证的基本病机为治节失常,实验结果表现为气虚-痰饮-血瘀,三者互结相胶互为因果。既往研究表明,慢阻肺到时缺氧致肺动脉高压的阶段,就是相当于传统医学慢性阻塞性肺疾病痰瘀阻肺证阶段,“肺失治节”的典型表现就相当于我们提出的慢性阻塞性肺疾病痰瘀阻肺证阶段,进而提出益气、化痰、祛瘀的治则就是指肺的治节重建方法。3.2实验研究结果3.2.1慢阻肺痰瘀阻肺证大鼠肺功能、血流动力学的变化及芪白平肺胶囊对其的影响3.2.1.1肺功能：从预防方面：与正常组比较,模型组FEV0.3、FVC、较正常组下降(P<0.01)；与模型组比较,芪预组、尼预组FEV0.3、FVC、 FEV0.3/FVC、均显著提高(P<0.01)；与芪预组比较,造模同时给药四周时与尼预组FEV0.3、FVC差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05),FEV0.3、FVC无差异(P>0.05)；停药四周时与尼预组FEV0.3、FVC差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05),FEV0.3/FVC无差异(P>0.05)。从治疗方面：与正常组比较,模型组FEV0.3、FVC较正常组下降(P<0.01)；与模型组比较,芪治组、尼治组FEV0.3、FVC FEV0.3/FVC、均显著提高(P<0.01)；与芪治组比较,造模同时给药四周时与尼治组FEV0.3、FVC差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05),FEV0.3/FVC无差异(P>0.05)；停药四周时与尼治组FEV0.3、FVC差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05),FEV0、3/FVC无差异(P>0.05)。3.2.1.2血液动力学检测：从预防方面：与正常组比较,模型组平均肺动脉压(mPAP)和平均颈动脉压(mCAP) 显著升高(P<0.01)；与模型组比较,芪预组、尼预组mPAP和mCAP均显著降低(P<0.01)；与芪预组比较,造模同时给药四周时与尼预组mPAP、mCAP差异无统计学意义(P>0.05)；停药四周时与尼预组mPAP差异无统计学意义(P>0.05),mCAP有差异(P<0.05)。从治疗方面：与正常组比较,模型组mPAP和mCAP显著升高(P<0.01)；与模型组比较,芪治组、尼治组mPAP和mCAP均显著降低(P<0.01)；与芪治组比较,造模同时给药四周时与尼治组mPAP、mCAP差异有统计学意义(P<0.01)；停药四周时与尼治组mPAP差异无统计学意义(P>0.05),mCAP有显著差异(P<0.01)。3.2.2慢阻肺痰瘀阻肺证大鼠血清细胞因子的变化及芪白平肺胶囊对其的影响3.2.2.1大鼠血清中ET-1、HIF-1α含量测定结果从预防方面：与正常组比较,模型组ET-1与HIF-1α含量显著增加(P<0.01)；与模型组比较,芪预组、尼预组ET-1与HIF-1α含量均降低(P<0.01或P<0.05)；与芪预组比较,造模同时给药四周时尼预组ET-1、HIF-1α差异有统计学意义(P<0.05)；停药四周时芪预组与尼预组ET-1、HIF-1α差异有显著统计学意义(P<0.01)。从治疗方面：与正常组比较,模型组ET-1与HIF-1α含量显著增加(P<0.01)；与模型组比较,给药四周后芪治组、尼治组ET-1、HIF-1 α含量均降低,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05),停药四周后芪治组ET-1、HIF-1α含量显著降低,差异有显著统计学意义(P<0.01),与尼治组差异无统计学意义(P>0.05)；与芪治组比较,给药四周时尼治组ET-1、HIF-1α差异无统计学意义(P>0.05)；停药四周时与尼治组ET-1差异无统计学意义(P>0.05),与尼治组HIF-1α差异有显著统计学意义(P<0.01)。3.2.2.2大鼠血清中CAM-2、VEGF含量测定结果从预防方面：与正常组比较,模型组CAM-2含量显著降低、VEGF含量显著增加,差异有统计学意义(P<0.01)；与模型组比较,芪预组、尼预组CAM-2含量均升高,VEGF含量均显著降低,差异有统计学意义(P<0.01)；与芪预组比较,造模同时给药四周时,尼预组CAM-2差异有统计学意义(P<0.05)、VEGF差异无统计学意义(P>0.05)；停药四周时与芪预组比较CAM-2、VEGF差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。从治疗方面：与正常组比较,模型组CAM-2含量显著降低、VEGF含量显著增加差异有显著统计学意义(P<0.01)；与模型组比较,造模同时给药四周时芪治组、尼治组CAM-2含量均升高,VEGF含量均显著降低,差异有显著统计学意义(P<0.01)；停药四周时CAM-2含量均升高,VEGF含量均降低,差异有显著统计学意义(P<0.01)；与芪治组比较,造模同时给药四周时尼治组CAM-2、VEGF差异无统计学意义(P>0.05)；停药四周时尼治组CAM-2差异无统计学意义(P>0.05),VEGF差异有统计学意义(P<0.05)。3.2.3慢阻肺痰瘀阻肺证大鼠肺组织NF-kB蛋白含量的变化及芪白平肺胶囊对其的影响从预防方面：与正常组比较模型组NF-kB平均吸光密度值明显增加；与模型组相比,芪预组、尼预组大鼠肺组织NF-kB平均吸光密度值降低。较正常组、模型组均有显著差异,(P<0.01)。与芪预组比较,尼预组吸光密度值增加,差异有统计学意义(P<0.01)。从治疗方面：与正常组比较,模型组NF-kB平均吸光密度值明显增加；与模型组相比,芪治组、尼治组大鼠肺组织NF-kB平均吸光密度值降低。芪治组与尼治组组间比较无明显差异,较正常组、模型组均有显著差异,(P<0.01)。3.2.4慢阻肺痰瘀阻肺证大鼠肺组织ETA受体和ETB受体mRNA的转录水平的变化及芪白平肺胶囊对其的影响3.2.4.1大鼠肺动脉中ETA受体mRNA水平测定结果从预防方面：结果显示,与正常组相比,模型组、芪预组和尼预组大鼠肺动脉ETA受体mRNA基因表达明显上升,差异有统计学意义(P<0.01)；与模型组相比,芪预组、尼预组ETA受体mRNA基因表达蛋白表达明显降低(P<0.01),差异有统计学意义；与芪预组比较,尼预组ETA受体mRNA蛋白表达升高(P<0.01或P<0.05)。从治疗方面：结果显示,与正常组相比,模型组与芪治组、尼治组大鼠肺动脉ETA受体mRNA蛋白表达明显上升,差异有统计学意义(P<0.01)；与模型组相比,芪治组、尼治组大鼠肺动脉ETA受体mRNA蛋白表达降低(P<0.01),差异有统计学意义；与芪治组比较,造模四周后给药四周与停药四周后尼治组ETA受体mRNA蛋白表达均升高,差异有统计学意义(P<0.01)。3.2.4.2大鼠肺动脉中ETB受体mRNA水平测定结果从预防方面：结果显示,与正常组相比,模型组、芪预组和尼预组大鼠肺动脉ETB受体mRNA基因表达明显减低,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)；与模型组相比,芪预组、尼预组ETB受体mRNA基因表达蛋白表达明显升高(P<0.01),差异有统计学意义；与芪预组比较,尼预组ETB受体mRNA蛋白表达减低(P<0.01或P<0.05)从治疗方面：结果显示,与正常组相比,模型组与芪治组、尼治组大鼠肺动脉ETB受体mRNA蛋白表达明显减低,差异有统计学意义(P<0.01)；与模型组相比,芪治组、尼治组大鼠肺动脉ETB受体mRNA蛋白表达升高(P<0.01),差异有统计学意义；与芪治组比较,造模四周后给药四周与停药四周后尼治组ETB受体mRNA蛋白表达均减低,但差异无统计学意义(P>0.05)4结论芪白平肺胶囊与尼可地尔防治COPD痰瘀阻肺证大鼠均有显著疗效。在有效的改善大鼠症状、体征的同时,显著改善了大鼠肺功能、血流动力学；降低了血清细胞因子内皮素-1(ET-1)、低氧诱导因子-1α (HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达,增加了钙调节蛋白(CAM-2)的表达；减少肺组织中NF-kB的表达,降低了大鼠肺组织ETA受体mRNA的转录水平及蛋白表达水平,同时增加了大鼠肺组织ETB受体mRNA的转录水平及蛋白表达水平。