目的:类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是以滑膜增生为特点,引起邻近的软骨组织和骨结构进行性破坏的慢性炎症浸润的多发性关节炎。滑膜为软骨供给营养,为关节提供润滑液。滑膜衬里层由滑膜衬里层细胞构成,滑膜衬里层细胞被称为滑膜细胞,由巨噬细胞样和成纤维细胞样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)构成。尽管T、B淋巴细胞以及巨噬细胞都参与了RA的发病机制,但滑膜成纤维细胞在该疾病中发挥重要的作用。滑膜衬里中FLS分泌的多种细胞因子能够加剧关节局部炎症反应导致软骨组织受到侵蚀。既往研究表明,肿瘤坏死因子(TNF)与其相应受体结合后能够启动RA中炎症的级联反应,在组织损伤和骨质破坏中发挥了重要作用。肿瘤坏死因子样配体1A(TL1A)属于肿瘤坏死因子超家族成员,有研究发现,TL1A与RA的活动度密切相关。TNF-α和IL-β刺激RA患者FLS能够产生TL1A,TL1A与其受体DR3结合后能够诱导多种炎症因子的生成和释放,从而放大炎症效应。目前,大部分关于TL1A在RA中的体外研究都是以T细胞为靶点。本实验通过对TL1A刺激FLS后产生炎症因子的检测分析以及对TL1A作用于FLS的机制研究,进一步探讨RA中,TL1A在FLS中的作用,为TL1A在该疾病中的功能提供了一定的理论依据。方法:(1)收集RA患者以及健康对照血清,通过ELISA方法检测血清中TL1A的表达;(2)体外培养RA患者FLS,TL1A处理细胞后检测细胞中相关炎症因子m RNA的水平,ELISA检测细胞培养基上清中的炎性因子浓度;(3)TL1A刺激细胞前,用信号通路抑制剂处理细胞,通过对刺激后产生炎性因子表达水平的检测,研究TL1A作用于FLS后所活化的信号通路;(4)流式细胞术检测FLS表面TL1A受体DR3,由于结果阴性,为证明TL1A如何作用于FLS,加入TNF受体拮抗剂处理细胞2小时,随后以TL1A刺激,通过对刺激后所产生的炎性因子表达水平的检测,研究TL1A与FLS作用的机制;(5)TL1A刺激FLS后弃去培养基洗净残留刺激剂,加入健康对照PBMC共培养3天,流式细胞术检测Th17的分群情况;(6)蛋白芯片检测3株经TL1A处理48小时前后FLS培养基上清细胞因子水平,分析研究TL1A刺激FLS后所产生的细胞因子在RA中的用作。结果:(1)ELISA检测RA组与正常对照组血清中TL1A表达水平,RA组TL1A水平显著高于正常对照组(P<0.05)。(2)应用RT-PCR和ELISA检测TL1A刺激FLS不同时间点(0,6,24,48 h)FLS产生炎性因子的表达情况。TL1A刺激FLS 6h后提取m RNA,RT-PCR结果显示刺激后IL-6和PGE2表达水平显著升高(P<0.05),ELISA检测IL-6表达水平结果显示随着刺激时间的延长,IL-6水平逐渐升高以48h最为显著(P<0.05),PGE2的水平并未随时间延长表现明显趋势,TL1A刺激组相较于未处理其水平都显著升高(P<0.05)。(3)在分别加入NF-κB、JNK抑制剂组中,TL1A刺激FLS产生IL-6水平相比未加入抑制剂直接刺激组显著降低(P<0.05)。TL1A刺激后FLS产生IL-6需通过NF-κB以及JNK的活化。(4)FLS中未能检测到DR3的表达。(5)拮抗TNF受体1、2后加入TL1A刺激,结果显示拮抗TNFR2后IL-6和PGE2水平显著降低(P<0.05)。TL1A能够与FLS表面的TNFR2结合发挥作用。(6)PBMC与TL1A刺激后的FLS共培养,PBMC中Th17比例显著上升(P<0.05)。(7)TL1A刺激FLS后培养基中大量趋化因子因子及生长因子水平升高。结论:(1)TL1A促进RA FLS产生IL-6通过NF-κB和JNK的激活。(2)TL1A通过与TNFR2结合作用于FLS促进IL-6的分泌。(3)TL1A促进RA FLS产生IL-6进一步上调Th17。