【目的】　　本课题拟在前期研究基础上，通过检测激素耐药或复发免疫性血小板减少症（ITP）患者经沙利度胺治疗后不同时间点外周血血小板计数、Tregs、Bregs、CD4+CD25+NRP-1+的表达以及血浆BAFF、NRP-1水平的变化，观察沙利度胺的疗效；通过体外实验研究经沙利度胺、BAFF处理后 ITP患者 Tregs、Bregs、CD4+CD25+NRP-1+的表达，进一步探讨沙利度胺治疗ITP的免疫机制。　　【方法】　　1.研究对象　　（1）选取2015年5月～2016年12月在广东医科大学附属医院血液科就诊的激素耐药或复发ITP患者14例作为研究对象，其中男性5例，女性9例，男女比例为1:1.8，年龄15~53岁。　　本研究激素耐药或复发ITP入组标准：①年龄15～65岁；②经一线药物（糖皮质激素和/或 IVIg、）和/或二线药物（环孢素、达那唑、硫唑嘌呤等）治疗无效（NR）或减量/停药后不能维持有效（R）及复发的ITP患者。排除标准：①孕妇及哺乳期妇女；②对沙利度胺过敏者；③存在活动的全身系统感染；④合并由肿瘤或其他自身免疫性疾病的患者；⑤研究者判断不适合入组者。　　（2）选取2016年11月～2017年3月在广东医科大学附属医院血液科就诊的5例初治ITP患者作为研究对象，年龄19~79岁，平均(43.36±6.98)岁，诊断符合张之南第二版《血液病诊断及疗效标准》；初始血小板计数2.3×109～10.7×109/L，平均(8.720±1.628)×109/L。　　本课题研究已获广东医科大学医学伦理委员会同意，所有入组人员均已告知实验目的，并签署知情同意书。　　2.研究方法　　（1）流式细胞术检测激素耐药或复发ITP患者服用沙利度胺前后不同时间点Bregs、Tregs以及CD4+CD25+NRP-1+细胞的表达。　　（2）流式细胞术检测初治ITP患者外周血单个核细胞经BAFF、沙利度胺干预后， Bregs、Tregs、CD4+CD25+NRP-1+细胞的表达。　　（3）免疫磁珠法分选CD19+B细胞　　（4）ELISA方法检测激素耐药或复发ITP患者服用沙利度胺前后不同时间点血浆中BAFF和NRP-1的浓度变化。　　【结果】　　1.沙利度胺治疗前后血小板（PLT）计数的变化　　沙利度胺治疗后8周、20周 PLT计数与治疗前比较明显升高[（105.8±20.46）×109/L、（113.3±27.76）×109/L vs（54.75±13.17）×109/L]，差异有统计学意义（P＜0.05）；治疗后4周、12周、16周PLT计数与治疗前比较有升高趋势[（75.15±27.12）×109/L、（106.1±26.56）×109/L、（69.98±20.62）×109/L vs（54.75±13.17）×109/L]，但无统计学差异（P＞0.05）。　　2．沙利度胺治疗前后外周血Bregs、Tregs、CD4+CD25+NRP-1+细胞的表达　　沙利度胺治疗后8、12、16、20周Bregs表达较治疗前明显增加[（20.70±3.496）%、（29.96±9.24）%、（36.97±9.39）%、（45.02±17.52）%vs（10.26±0.89）%]，差异有统计学意义（P＜0.05）；治疗后4周Bregs表达较治疗前有升高趋势[（14.93±2.54）%vs（10.26±0.89）%]，差异无统计学意义（P＞0.05）。　　沙利度胺治疗后12、20周时Tregs表达较治疗前明显增加[（2.94±0.59）%、（3.057±0.745）%vs（1.264±0.422）%]，差异有统计学意义（P＜0.05）；治疗后4、8、16周时Tregs表达较治疗前有升高趋势[（1.564±0.26）%、（1.942±0.62）%、（3.033±0.85）%vs（1.264±0.422）%]，差异无统计学意义（P＞0.05）。　　沙利度胺治疗后12、16、20周 CD4+CD25+NRP-1+表达较治疗前明显增加[（11.54±4.4）%、（12.72±4.99）%、（5.357±1.60）%vs（2.10±0.58）%]，差异有统计学意义（P＜0.05）；治疗后8周 CD4+CD25+NRP-1+表达较治疗前有升高趋势[（8.16±3.12）%vs（2.10±0.58）%]，差异无统计学意义（P＞0.05）；治疗后4周CD4+CD25+NRP-1+表达较治疗前未见明显变化[（1.61±0.25）%vs（2.10±0.58）%]，差异无统计学意义（P＞0.05）。　　3.沙利度胺治疗前后外周血血浆BAFF和NRP-1浓度的变化　　沙利度胺治疗后4周、12周、20周外周血血浆BAFF浓度较治疗前明显降低[（314.9±123.9）pg/mL、（279.2±104.9）pg/mL、（287.2±106.7）pg/mL vs.（683.5±95.62）pg/mL]，差异有统计学意义（P＜0.05）；治疗后8周、16周较治疗前呈下降趋势[（421.2±113.7）pg/mL、（391.2±134.7）pg/mL vs.（683.5±95.62）pg/mL]，差异无统计学意义（P＞0.05）。　　沙利度胺治疗后4周、12周、16周、20周外周血血浆NRP-1浓度较治疗前明显升高[（180705±45603）pg/mL、（178186±41677）pg/mL、（163697±45931） pg/mL、（146409±26795）pg/mL vs（74036±9547）pg/mL]，差异有统计学意义（P＜0.05）；治疗后8周较治疗前呈升高趋势[（114520±20569）pg/mL vs（74036±9547）pg/mL]，差异无统计学意义（P＞0.05）。　　4.沙利度胺治疗后Bregs、Tregs、CD4+CD25+NRP-1+表达与PLT计数的相关性　　用Pearson相关分析方法，分别对Bregs表达和PLT计数、Tregs表达和PLT计数、CD4+CD25+NRP-1+表达和PLT计数做相关性分析，得到r（Bregs）=0.884、r（Tregs）=0.782、r（NRP-1）=0.853(P＜0.05)， Bregs、Tregs以及CD4+CD25+NRP-1+表达与PLT计数有较高的相关性。　　5.沙利度胺治疗后外周血血浆中BAFF和NRP-1的浓度与PLT计数的相关性　　用Pearson相关分析方法，分别对BAFF的浓度和PLT计数(×109/L)、NRP-1的浓度和PLT计数(×109/L)做相关性分析，得到r（BAFF）=-0.904、r（NRP-1）=0.890(P＜0.05)，血浆中BAFF和NRP-1的浓度与PLT计数有较高的相关性。　　6.初治 ITP患者外周血单个核细胞（PBMC）加入 BAFF和沙利度胺后， Bregs、Tregs以及CD4+CD25+NRP-1+表达变化　　BAFF对Bregs的影响：PBMC+BAFF组、PBMC去除B细胞+B细胞+BAFF组Bregs的表达较PBMC组降低，差异有统计学意义（P＜0.05）；PBMC去除B细+BAFF组与PBMC组比较，Bregs表达未见明显变化（P＞0.05）。　　沙利度胺对Bregs的影响：PBMC+THD组Bregs的表达较PBMC+DMSO组升高，差异有统计学意义（P＜0.05）；PBMC+THD+BAFF组与 PBMC+DMSO;组比较，Bregs表达未见明显变化（P＞0.05）。　　BAFF对Tregs的影响： PBMC去除B细胞+B细胞+BAFF组Tregs的表达较PBMC组降低，差异有统计学意义（P＜0.05）；PBMC+BAFF组、PBMC去除B细+BAFF组与PBMC组比较，Tregs表达呈下降趋势，差异无统计学意义（P＞0.05）。　　沙利度胺对Tregs的影响：PBMC+THD组、PBMC+THD+BAFF组Tregs的表达与PBMC+DMSO组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。　　BAFF对CD4+CD25+NRP-1+表达的影响：PBMC+BAFF组、PBMC去除B细胞+B细胞+BAFF组CD4+CD25+NRP-1+的表达较PBMC组降低，差异有统计学意义（P＜0.05）；PBMC去除B细+BAFF组与PBMC组比较，CD4+CD25+NRP-1+表达未见明显变化（P＞0.05）。　　沙利度胺对 CD4+CD25+NRP-1+表达的影响：PBMC+THD组、PBMC+THD+BAFF组CD4+CD25+NRP-1+的表达与PBMC+DMSO组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。　　【结论】　　沙利度胺对激素耐药或复发ITP具有一定疗效，可能通过恢复免疫抑制细胞亚群的数量及其功能从而起到治疗作用；高浓度BAFF引起的B细胞过度活化可以导致Bregs、NRP-1数量或功能缺失可能是ITP发病机制之一，沙利度胺可能通过阻断BAFF对B细胞的活化可以恢复Bregs的正常比例和功能，从而发挥治疗ITP的作用。