论文部分内容阅读
目的:研究抑郁模型大鼠及正常大鼠外周血浆及中枢下丘脑、脑干nesfatin-1水平的病理生理差别;探索抑郁模型大鼠nesfatin-1 水平变化与其情绪行为变化的关联;探查nesfatin-1水平变化与大鼠抑郁样行为及其与下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴(hypothalamic pituitary adrenalaxis,HPA)及单胺递质合成酶的相关性;探索nesfatin-1在抑郁发病中的可能作用机制。方法:采用随机数字表法将12只成年雄性SD大鼠随机分为正常对照组(NC组)和抑郁模型组(CUMS组),采用旷场实验(open field test,OFT)评估两组大鼠造模前的行为,初步统计两组大鼠行为学无明显差异时则造模开始,CUMS组予以连续5周7种不同的慢性轻度不可预见性刺激(chronic unpredictable mild stress,CUMS),NC组则正常喂养,5周后采用糖水偏好实验(sucrose preference test,SPT)、强迫游泳实验(forced swimming test,FST)分别同时评估两组大鼠的行为,收集大鼠的血浆,取其新鲜的下丘脑组织及脑干组织,检测两组大鼠血浆皮质酮及下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropin releasing hormone,CRH)水平以评估HPA的活性,比较两组大鼠脑干酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)及色氨酸羟化酶(tryptophan hydroxylase,TPH)表达水平变化,检测血浆、下丘脑、脑干nesfatin-1水平,比较两组大鼠nesfatin-1水平变化,血浆指标检测方法采用酶联免疫吸附实验(Enzyme linked immune-absorbent Assay,Elisa 法),中枢脑组织指标检测采用蛋白质免疫印迹(western blot)法,将nesfatin-1水平与大鼠的行为学指标、HPA轴及单胺递质合成酶指标分别进行相关性分析。结果:(1)大鼠行为学分析结果:造模前大鼠行为学分析结果:CUMS组体重[(307.00±11.23)g]相比于NC组[(306.00±13.52)g],两组大鼠体重差异无统计学意义(t=-0.139,P=0.892),OFT中直立次数CUMS组[(7.83±5.71)次]对NC组[(9.83±3.82)次],差异无统计学意义(t=0.714,P=0.492),OFT 中水平运动总距离,CUMS 组[(10154.00±93.53)cm]对 NC 组[(10119.83±75.15)cm],差异无统计学意义(t=-0.698,P=0.501)。造模后大鼠行为学分析结果:与NC组相比,CUMS组大鼠体重增长明显减慢[(85.17±28.31)g]对[(121.00±12.60)g],差异具有统计学意义(t=2.830,P=0.018),SPT中,CUMS组大鼠糖水偏嗜度明显降低[(0.68士0.06)%]对[(0.91±0.05)%],差异具有统计学意义(t=2.830,P=0.000),FST中,CUMS组大鼠强迫游泳不动时间明显延长[(108.83±18.90)s]对[(65.83±11.16)s],差异具有统计学意义(t=-4.798,P=0.001)。(2)nesfatin-1水平检测结果:相比于NC组,CUMS组大鼠血浆nesfatin-1水平明显增高[(3.50±1.23)ng/ml]对[(1.80±0.87)ng/ml],差异具有统计学意义(t=-2.778,p=0.020),同时下丘脑及脑干中nesfatin-1蛋白相对表达水平也显著升高,分别为(0.17±0.06)对(0.10±0.03)及(0.22±0.12)对(0.15±0.40),差异具有统计学意义(=-2.450,P=0.037 及 t=-4.158,P=0.002)。(3)HPA轴相关指标检测结果:两组相比较,外周血中CUMS组大鼠血浆皮质酮水平(166.53±5.34pg/ml)显著高于NC组(132.71±14.31pg/ml),差异具有统计学意义(t=-5.424,P=0.000),中枢下丘脑CRH蛋白相对表达水平CUMS组与NC组无明显差别(P=0.537)。(4)脑干TPH及TH蛋白相对表达水平:脑干TPH蛋白及TH蛋白相对表达水平相比NC组,CUMS组表达均显著下降,TPH蛋白表达为(0.29±0.13)对(0.52±0.05),差异具有统计学意义(t=4.047,P=0.002),TH蛋白表达为(2.69±0.27)对(3.27±0.16),差异具有统计学意义(t=4.584,P=0.001)。(5)相关分析结果:将nesfatin-1水平与大鼠行为学指标进行相关分析发现,CUMS组大鼠血浆nesfatin-1水平与强迫游泳不动时间呈正相关(r=0.922,P=0.009),与大鼠体重增长量呈负相关(r=-0.825,P=0.043),与糖水偏嗜度无相关关系(P>0.05)。同时发现CUMS组大鼠血浆nesfatin-1水平与血浆皮质酮水平呈正相关(r=0.827,P=0.042),脑干中CUMS组大鼠nesfatin-1蛋白表达水平与TPH蛋白表达水平呈负相关(r=-0.832,P=0.044),但与TH蛋白表达水平无相关关系(P>0.05)。结论:抑郁模型大鼠外周血及中枢下丘脑、脑干nesfatin-1水平皆明显增高,这种病理性改变可能参与抑郁样行为的发生过程,nesfatin-1的改变可能通过影响HPA轴介导抑郁样行为。脑干nesfatin-1蛋白表达水平增高可能通过影响TPH蛋白表达水平,进而影响5-HT的合成,这可能是影响抑郁样行为的另一条重要的神经内分泌通路。