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泰乐菌素、泰万菌素和替米考星是大环内酯类抗生素,在兽医临床上被广泛用于治疗畜禽支原体和革兰氏阳性菌和某些革兰氏阴性菌所引起的感染性疾病。然而当过量或不当使用这些抗生素时,会造成药物在食品动物中的残留。抗生素及其代谢产物在动物组织和器官内蓄积达到一定浓度,可对前庭和耳蜗神经造成损害,导致眩晕和听力减退,甚至会造成对肝、肾和造血系统的严重损害。本研究的目的是针对泰乐菌素、泰万菌素和替米考星这三种大环内酯类动物专用抗生素,建立其在动物性食品中提取、分离和检测的反相高效液相色谱法。1.研究了在等度洗脱条件下,泰乐菌素、泰万菌素和替米考星同步分离检测的HPLC-UV分析方法。通过考察色谱柱、柱温、流动相组成、流速等色谱分析条件对泰乐菌素、泰万菌素和替米考星标准品的保留时间及分离检测结果的影响,优化了色谱分析条件,建立了一种反相高效液相色谱法同步检测泰乐菌素、泰万菌素和替米考星的分析检测方法。最终选择的优化的色谱条件为Agilent SB-C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),柱温为30℃,流动相为乙腈-甲醇-0.01mol/L磷酸二氢铵溶液=45：40：15(v：v：v),检测波长为280nm,流速为1.OmL/min,运行时间15min。3种药物浓度在0.5-25μg/mL的范围内,峰面积与质量浓度呈现良好的线性关系(相关系数r>0.9990),此方法的最低检测限为0.25μg/mL,最低定量限均为0.5μg/mL,同内和同间变异系数均小于5%。2.研究了牛奶、鸡蛋和猪肉中泰乐菌素、泰万菌素和替米考星的提取、净化、富集浓缩等样品前处理方法。从提取溶剂、固相萃取柱、淋洗液与洗脱液、洗脱液用量等方面对动物性食品中泰乐菌素、泰万菌素和替米考星的提取、净化进行了分析,最终确定了以乙腈为提取剂,选用ProElut C18固相萃耿柱净化生物样品,选定5%乙腈水为淋洗液,乙腈为洗脱液,洗脱液的体积为6mL。在本试验建立的色谱检测方法下,牛奶、鸡蛋和猪肉中泰乐菌素、泰万菌素和替米考星的平均回收率为63.81～84.71%,最低检测限均为20μg/Kg,最低定量限均为25μg/Kg。此方法的日内变异系数小于5%,日间变异系数小于10%。