青枯雷尔氏菌的PopP1是依赖三型分泌系统(T3SS)分泌到寄主植物细胞的效应蛋白,与AvrA蛋白一起决定了青枯菌在烟草植物上的非亲和性互作关系;瞬时表达PopP1,在烟草植物的叶片中诱导细胞坏死,揭示具有无毒基因的功能。本研究采用农杆菌介导的遗传转化技术,无毒基因PopP1转化烟草,并检测转基因烟草对青枯病的抗性,为青枯病的抗病育种工程提供新的思路和参考。论文主要完成了一下几个方面的研究内容:(1)通过重叠PCR实验方法,分别构建了由组成型35S启动子和病原诱导型PR1a启动子与PopP1基因的融合片段。用HindⅢ-EcoRI双酶切以后,连接到双元载体pCAMBIA2300中,得到两种启动子驱动PopP1基因表达的转基因载体p2300-35P1和p2300-PRP1;(2)将构建的转基因载体p2300-35P1通过瞬时表达的方法,检测载体构建的有效性,观察到瞬时表达PopP1诱导烟草的坏死;(3)通过农杆菌EHA105介导将转基因载体转化进入烟草NC89品种。得到TO代p2300-35P1转基因烟草55棵,p2300-PRP1转基因抗性烟草50棵。提取这总共105棵植株的基因组,用PopP1基因的特异性引物扩增,明确了最终转化成功的转基因植株分别是50和43棵,转基因阳性率为90.9%和86.0%。(4)提取13棵T0代p2300-35P1转基因烟草的RNA,通过Real-time PCR实验,检测转基因烟草中PopP1基因的表达水平;用同样的方法检测了 6棵TO代p2300-PRP1转基因烟草的PopP1基因表达。从两种转基因植株中分别挑选了PopP 基因表达水平较高6个株系,种植T1代转基因植物。用PopP1基因的特异性引物扩增T1代转基因植物的基因组,明确阳性植株。采用灌根接种的方法,检测转基因植株对青枯病的抗性。转基因烟草在发病率上没有明显的减少,但发病的严重程度明显降低。