【摘 要】
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应用RNA干扰技术设计构建针对血管内皮细胞生长因子受体KDR的siRNA,将靶向KDR的siRNA注射至小鼠人肝癌细胞HHCC皮下移植瘤瘤体内,观察其对移植瘤生长情况的影响。建立人肝癌
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应用RNA干扰技术设计构建针对血管内皮细胞生长因子受体KDR的siRNA,将靶向KDR的siRNA注射至小鼠人肝癌细胞HHCC皮下移植瘤瘤体内,观察其对移植瘤生长情况的影响。建立人肝癌细胞HHCC皮下移植瘤小鼠模型,设计针对KDR编码区的有短发夹结构的三条DNA序列,克隆到pGCsi.H1/neo/GFP载体中构建三个重组质粒,分别命名为KDR-siRNA1、KDR-siRNA2和KDR-siRNA3;对重组质粒进行酶切鉴定、DNA测序分析;将重组质粒注射入小鼠移植瘤瘤体内,动态观察肿瘤体积并于2周后处死小鼠称取瘤重。结果表明:KDR在人肝癌细胞HHCC中表达。KDR-siRNA表达载体用限制性内切酶NdeI和SmaI进行单酶切后分别产生约632bp、5480 bp和2403 bp、3709 bp两个片段,与预计结果相同;测序结果与设计的编码相应短发夹状KDR-siRNA的寡核苷酸序列一致;三个KDR-siRNA表达载体注射后的小鼠移植瘤与各对照组相比,移植瘤生长缓慢,瘤体积明显缩小,瘤重明显减轻。其中以KDR-siRNA3的作用最为明显。结论:KDR靶向RNA干扰重组体质粒构建成功,该载体能有效抑制肝癌HHCC细胞小鼠移植瘤的生长,为探索KDR介导的肿瘤基因治疗的新途径奠定了实验基础。
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