论文部分内容阅读
目的：当今恶性肿瘤发展迅速,已成为人类健康的严重威胁。恶性肿瘤的治疗主要包括手术治疗、化疗及放疗,大概有近60%的病人接受化疗。紫杉醇作为卵巢癌化疗的一线药物,其有效率可达70%-80%,但是卵巢癌的5年生存率仍徘徊在30%-40%,主要原因是治疗过程中肿瘤出现耐药,导致化疗失败。据统计,90%以上肿瘤患者的死亡在不同程度上是受肿瘤耐药的影响。转化生长因子诱导的基因(transforming growth factor-β induced gene, TGFBI)蛋白属于细胞外基质分子之一,最初被关注的是其调节细胞粘附和迁移的能力。在不同的肿瘤中,TGFBI蛋白的表达也不相同,如在结肠癌、食管癌、肾癌其表达升高,而在非小细胞肺癌、乳腺癌中表达将低。有研究显示,TGFBI基因的甲基化与紫杉醇耐药有关。TGFBI表达的缺失可增加非小细胞肺癌对凋亡的抗性,且增加TGFBI的表达可以提高其对多种化疗药物的敏感性。说明TGFBI蛋白与肿瘤耐药性有关。许多研究提示多倍体细胞可以引起肿瘤耐药。我们的前期研究在纺锤丝毒性药物的诱导下可形成稳定生长的多倍体肿瘤细胞MDA-MB-231-T,且该细胞除了对VP16更敏感外,对紫杉醇类、表阿霉素、奥沙利销、长春新碱及氟尿嘧啶等多种化疗药物都表现为耐药,且与原肿瘤细胞相比具有显著性差异。这种多倍体细胞与原代细胞相比,低表达TGFBI蛋白。而将TGFBI基因转染MDA-MB-231-T,发现可以增加其对紫杉醇的敏感性。那么多倍体肿瘤细胞的发生、肿瘤细胞的耐药与TGFBI蛋白的表达三者之间是否有密切联系呢?现国内外未见报道。本实验以乳腺癌MDA-MB-231细胞为研究对象,利用细胞转染技术使其瞬时过表达TGFBI蛋白,运用MTT法检测两组细胞的细胞生长抑制率,运用流式细胞仪比较两组细胞的细胞周期、细胞凋亡以及细胞的倍体变化,初步探讨TGFBI蛋白与多倍体肿瘤及肿瘤耐药之间的关系。方法：1.将载有TGFBI基因的质粒及空质粒分别瞬时转染MDA-MB-231细胞,并分为实验组与对照组。2.利用western blot技术检测两组细胞中TGFBI蛋白的表达,验证转染效果。3.MTT法比较两组细胞的细胞生长抑制率。4.利用流式细胞仪通过PI染色比较两组细胞的细胞周期及细胞染色体倍体变化。5.利用流式细胞仪通过Annexin V-FITC/PI法比较两组细胞的细胞凋亡情况。结果：1. western blot检测结果显示：TGFBI蛋白在实验组高表达,说明TGFBI基因已成功转染MDA-MB-231细胞。2.MTT实验结果显示：以不同浓度的紫杉醇处理过表达TGFBI蛋白的MDA-MB-231细胞及转染空质粒的对照组细胞72小时后,相对于转染空质粒的对照组细胞,过表达TGFBI的细胞表现出更高的生长抑制率。3.细胞周期实验结果显示：紫杉醇处理过表达TGFBI蛋白的MDA-MB-231细胞较转染空质粒的对照组细胞表现出更高的G2/M阻滞,且对照组中多倍体细胞的生成率明显较实验组高。4.细胞凋亡实验结果显示：对照组细胞的凋亡率明显高于实验组。结论：1. TGFBI蛋白是抑制紫杉醇诱导多倍体细胞产生的因素之一。2.上调TGFBI蛋白可以增加肿瘤细胞对纺锤丝毒性药物的敏感性。3. TGFBI蛋白是缓解肿瘤耐药的因素之一。4.在肿瘤组织中,多倍体细胞的产生是引起肿瘤耐药的原因之一。