论文部分内容阅读
摘要：前列腺癌已成为继肺癌的第二大男性健康杀手,前列腺特异性抗原(prostate specific antigen, PSA)目前被认为是前列腺癌最有效的生物标志物并广泛应用于前列腺癌的临床诊断。单独检测血清中的PSA含量来诊断前列腺癌容易造成误诊,尤其是在灰区(PSA浓度在4～10ng·mL-1)前列腺癌与前列腺增生之间易误诊,而游离前列腺特异性抗原(f-PSA)与总的前列腺特异性抗原(t-PSA)之比(f/t)被认为是目前区分灰区前列腺癌与前列腺增生最有效的方法。表面等离子体激元共振技术具有快速灵敏、检测限低、免标记、耗样量少、实时监测等特点；已广泛应用于药物的筛选、食品的分析检测、环境监测和重大疾病的临床诊断等领域。纳米金具有良好的生物亲和性,在检测中常被用来放大信号,将纳米金应用到SPR技术中能克服传统的SPR技术很难直接检测低浓度、小分子量的物质的缺点。本文在研究中利用表面等离子体子共振技术灵敏度高、检测限低的优点,纳米金放大信号,抗原抗体间的特异性结合,建立了一种SPR双通道同时检测f-PSA和t-PSA的检测方法。磁性纳米粒子具有优良的磁导向性、生物降解功能、生物亲和性和活性能力基团等性质,广泛用于生物医学领域。本文用化学法制备了直径约为30nm大小的Fe3O4@Au磁性纳米材料,用紫外-可见吸光光度法、TEM对其进行表征,粒径分布均匀,分散性较好。本论文的主要工作包括：一、合成分散性较好直径约为20nm的纳米金,用PSA antigen包裹纳米金制备了金标抗原探针,在检测过程中用来放大SPR信号。二、探究了直接检测法、免疫夹心法和抑制竞争法检测f-PSA和t-PSA。因t-PSA在血清中的浓度较大,而且其分子量也较大,故可以对其直接检测。f-PSA在0.05～0.4ng·mL-1范围内呈现线性范围,t-PSA在1～20ng·mL-1之间呈线性范围。最后检测实际样品,得出正常人血清中f/t值为28.95%,前列腺增生患者的平均f/t值为22.40%,前列腺癌患者的平均f/t值为16.60%。所得的区分前列腺癌与前列腺增生的f/t值与文献报道的接近,为前列腺癌的临床诊断,灰区前列腺癌和前列腺增生的区分提供了新的检测方法。三、通过共沉淀法制备了粒径较小的Fe304纳米粒子,并用四甲基氢氧化铵做稳定剂。以Fe304纳米粒子为核,再利用柠檬酸钠作还原剂还原HAuCl4,得到的Au包裹在Fe304外面制备Fe3O4@Au磁性纳米粒子。通过紫外-可见吸光光谱和TEM对其进行表征,并对实验条件进行了摸索,最终制得粒径分布均匀、分散性好的Fe3O4@Au磁性纳米粒子。