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目的：通过实验摸索腺病毒大规模扩增的条件、细胞破碎的最优方法、硫酸铵沉淀的最适浓度、疏水柱及离子交换柱联用纯化腺病毒的最佳工艺、腺病毒最佳的保存条件、最后通过体内体外实验研究纯化后的腺病毒活性。方法：以腺病毒的滴度、纯度和回收率来考察最后的结果。一、比较不同MOI值、感染时间下腺病毒的滴度，用于确定大规模扩增的最佳条件。二、比较反复冻融法、超声波法和高压渗透压法后腺病毒的滴度，确定细胞破碎的最佳方法。三、配置不同百分比的饱和硫酸铵来沉淀腺病毒，比较回收率后确定最适合的饱和硫酸铵浓度。四、比较不同疏水柱类型和盐浓度、阴离子交换柱的类型，通过腺病毒的滴度、纯度和回收率来确定最适合的工艺条件。五、采用正交设计的实验的方法确定腺病毒的最适合保存条件。六、通过ELISA法比较纯化前后腺病毒在体内体外绿色荧光蛋白的表达量，以及蛋白的表达量随腺病毒感染的滴度、时间的变化。本实验参考了相关文献后，设计了用硫酸铵沉淀法将腺病毒上清中的腺病毒浓缩粗纯，不经过处理直接上疏水柱，再过离子交换柱的办法来纯化腺病毒，最后通过体内体外比较纯化前后的蛋白表达量。结果：一、腺病毒大规模扩增的最佳条件为：MOI值为10、感染时间为24小时，收获的腺病毒滴度最高。二、比较反复冻融法、超声波法和高压渗透压法发现超声波法破碎细胞的效果最好，破损率等达到96%。三、通过实验发现硫酸铵沉淀法最适合浓度为60%的饱和硫酸铵，回收率能达到70%。四、使用美国GE Healthcare公司的Sepharose High Performance柱，在平衡缓冲液A液：2.5M（NH4）2SO4，40mM Tris-Hcl(pH8.0)、5%甘油、1mM MgCl2；洗脱缓冲液B液：40mM Tris-Hcl(pH8.0)、5%甘油、1mM MgCl2下梯度洗脱20个柱体积，腺病毒回收率为79.6%。五、使用阴离子交换柱Q xl，在平衡平衡缓冲液A液：40mM Tris-Hcl(pH=8.0)、5%甘油、1mM MgCl2；平衡缓冲液B液：1M NaCl，40mM Tris-Hcl(pH=8.0)、5%甘油、1mM MgCl2下，梯度洗脱20个柱体积，腺病毒回收率为92.3%。最后的总回收率达到53.7%，纯度为91.0%。六、腺病毒的最适合保存条件为；-80度、5%甘油、1mM MgCl2。七、纯化后的腺病毒表达的的绿色荧光蛋白的表达量要高于纯化前的。结论：通过腺病毒硫酸铵沉淀、过疏水柱再过离子交换柱的办法来纯化腺病毒的办法得到的腺病毒沉淀与传统的CsCl密度梯度离心法类似、但回收率高于后者。因此本方法好于传统的CsCl密度梯度离心法。同时通过实验证明纯化后的腺病毒活性要好于纯化前。本实验提供一种腺病毒扩增及纯化的方法，及腺病毒保存及注射的最佳条件，可以给其他腺病毒基因药物的方面的研究提供借鉴。