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研究目的:心肌炎是(myocarditis)由多种病毒感染、药物毒性作用等多种病因引起的心脏急性炎症性疾病,伴有各种炎症细胞浸润与心肌细胞损伤甚至坏死。部分心肌炎可快速发展至扩张型心肌病(Dilated cardiomyopathy,DCM),同时扩张型心肌病患者血清标本中可检测出多种抗心肌的自身抗体,证实了自身免疫性心肌炎(autoimmune myocarditis)在扩张型心肌病发病中起着重要的作用。因此,建立合适的自身免疫性心肌炎动物模型,模拟心肌炎免疫性损伤的发病过程,在心肌炎发病机制、自身免疫损伤的研究,及治疗效果及预后中有着至关重要的意义。本实验拟建立合适的自身免疫性心肌炎小鼠模型,通过PCR及免疫组化等方法研究程序性细胞死亡分子1配体(programmed death ligand 1,PD-L1)在自身免疫性心肌炎小鼠中表达情况,并寻求一种方法可以调控小鼠心脏内皮细胞表达PD-L1,以期为心肌炎发病机制的研究提供一种新的研究方向,并为临床治疗心肌炎提供一种新的治疗措施。研究方法:(1)构建了两种T细胞过继转输诱导自身免疫性心肌炎模型,并通过免疫组化、PCR等方法观察在两种模型中PD-L1的表达水平。(2)先后使用抗PECAM-1抗体和抗ICAM-2抗体的免疫磁珠分离纯化获得小鼠心脏内皮细胞,通过镜下观察和抗CD31抗体和VE-Caherin染色鉴定内皮细胞。(3)探索干扰素对小鼠心脏内皮细胞PD-L1调控。(3)通过在体实验,研究IFN对小鼠心脏内皮细胞PD-L1的调控。(4)通过在体实验,研究含CpG基序的寡聚脱氧核苷酸(Oligodeoxynucleotides containing CpG motifs,CpG-ODN)对小鼠心脏内皮细胞PD-L1的表达。(5)构建自身免疫性心肌炎,通过石蜡包埋切片计算病理积分,观察CpG-ODN对自身免疫性心肌炎治疗作用。(6)采用PCR检测心脏组织中IL-1β、TNF-α的表达水平。研究结果:(1)两种自身免疫性心肌炎中均发现心脏组织mRNA表达PD-L1显著高于对照组;(2)通过免疫组化发现,心脏组织表达PD-L1与CD31呈一致性。(3)采用二次分选法所纯化获得的小鼠心脏微血管内皮细胞生长良好,形态正常,内皮细胞CD31染色阳性率达99.9%,且VE-Caherin表达率达85.1%,并可在体外稳定传代培养,且冻存后复苏仍保持良好活性。(4)Real-time PCR结果显示10U/ml IFN-γ、100U/ml IFN-β刺激小鼠心脏内皮细胞8小时后,小鼠心脏内皮细胞PD-L1均上调,差距有统计学意义;(5)在体实验结果发现,IFN-β、IFN-γ未能上调小鼠心脏PD-L1 mRNA表达,且未能上调小鼠心脏PD-L1蛋白表达;(6)在体实验结果发现,CpG ODN能上调小鼠心脏PD-L1 mRNA表达,且免疫组化同样得以证实;(7)通过H&E染色并对心肌炎小鼠进行组织病理学积分量化分析,结果发现相对PBS干预组,预防使用CpG-ODN组可以使自身免疫性心肌炎小鼠心肌炎程度较之减轻。(8)经荧光实时定量RT-PCR方法检测,CpG-ODN组中IL-1β表达量显著低于PBS对照组,IL-1β(0.313±0.022)vs.(1.180±0.148);TNF-α(0.075±0.011)vs.(0.255±0.018)。结论:PD-L1参与了自身免疫性心肌炎的病程,CpG-ODN能上调小鼠心脏内皮细胞表达PD-L1,并通过上调PD-L1降低了小鼠心肌炎炎症程度。在此实验基础上,CpG-ODN很可能成为治疗自身免疫性心肌炎的有效方法。