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背景结肠癌是在各种致癌因素作用下结肠黏膜上皮和腺体发生恶变,逐渐发展成恶性肿瘤,其好发部位为直肠与乙状结肠交界处。在我国,结肠癌在男性所有癌症中的发病率排名第五,在女性中排名第四,在男性和女性中死亡率均排名第五。此外,其发病率及死亡率仍在增加[1]。结肠癌的五年生存率高度取决于疾病的阶段,早期结肠癌5年生存率可能高达90%,不幸的是,诊断时超过60%的病例已经发展到晚期,5年存活率约为8-9%[2]。腺瘤是肠癌的主要前体病变,通常发展成大肠癌,但其过程缓慢,局部无明显症状,这是延误诊断的主要因素,从而导致预后不良和高死亡率[3],因此结肠癌的早期诊断至关重要。目前TNM分期是临床工作中评估恶性肿瘤预后主要工具,分期越高,肿瘤进展程度越高,预后越差。然而同样分期的患者之间有时预后存在一定差异,这主要取决于肿瘤异质性[4]。越来越多的证据表明,结肠癌的发生与致癌信号通路的激活和肿瘤抑制信号的失活有关,这主要是由于基因突变和表观遗传学改变,后者包括DNA甲基化,组蛋白乙酰化和非编码RNA[5]。高迁移率族蛋白A2（High mobility group A2,HMGA2）是一种非组蛋白的转录因子,能够调节多个基因的转录,并改变染色质结构[6]。它通过上调癌症干细胞标志物（CD44,ALDH1,Sox2,Oct4）以及EMT相关因子（Snail,β-catenin）的表达,从而促进肿瘤生长及细胞迁移[7]。前B细胞白血病（Pre-B-cell leukemia homeobox,PBX）家族是一组含同源结构域的转录因子和果蝇外链基因的同源物。人类有4个PBX同源物PBX1-4[8]。PBX3与其他PBX蛋白不同,因为它可以作为单体或同型二聚体与DNA形成稳定的相互作用,并具有TGATTGATTTGAT的共有结合序列[9]。PBX3能够通过上调N-钙粘蛋白和波形蛋白、下调E-钙粘蛋白的表达诱导上皮-间质转化（Epithelial-mesenchymal Transition,EMT）;能够上调磷酸化AKT、ERK的水平,参与多种恶性肿瘤的发生发展[10-12]。PBX3能够干扰转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）诱导的EMT;通过上调LIN28的表达,抑制let-7b,从而促进HMGA2表达[13]。目前关于HMGA2和PBX3蛋白在结肠癌中的表达情况及作用机制、与患者预后关系以及两者在结肠癌中的相关性研究报道较少。目的检测HMGA2和PBX3蛋白在结肠癌组织及癌旁组织中的表达情况;研究结肠癌组织中HMGA2和PBX3蛋白表达的相关性;分析HMGA2和PBX3蛋白的表达与结肠癌不同病理参数及预后的关系,为结肠癌患者的早期诊断、预后评估提供新的标志物,为结肠癌患者的个体化治疗提供新的干预靶点。材料与方法收集2012年5月-2014年5月于郑州大学附属肿瘤医院行结肠癌根治术患者的结肠癌组织及癌旁组织（距癌组织≥5cm）石蜡包埋标本各65例,实验组为结肠癌组织,对照组为癌旁组织。根据2018版NCCN指南并结合结肠癌患者的术后病理完成TNM分期;通过免疫组织化学的方法检测HMGA2和PBX3蛋白在结肠癌组织及癌旁组织的表达情况,用χ2检验分析HMGA2和PBX3蛋白在两组中的表达差异,并分析HMGA2和PBX3蛋白表达情况与结肠癌患者的年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移、TNM分期等术后临床病理因素之间的关系;采用Pearson相关性分析了解结肠癌组织中HMGA2和PBX3蛋白之间表达的相关性;用Kaplan-Meier法和Log-rank检验分析HMGA2和PBX3蛋白表达与结肠癌患者术后DFS和OS之间的关系;采用单因素及多因素COX比例风险模型分析预后因素,并计算危害比（hazard ratio,HR）和其95%可信区间（confidence interval,CI）。结果1.在65例结肠癌组织中,45例（69.23%）HMGA2蛋白表达阳性,65例癌旁组织中,有10例（15.38%）HMGA2蛋白表达阳性,两组间差异有统计学意义（P<0.001）;在65例结肠癌组织中,26例（40.00%）PBX3蛋白表达阳性,65例癌旁组织中,有10例（15.38%）PBX3蛋白表达阳性,两组间差异有统计学意义（P=0.002<0.05）。2.65例结肠癌组织中,有22例（33.85%）HMGA2蛋白、PBX3蛋白表达均阳性,有23例（35.38%）HMGA2蛋白表达阳性、PBX3蛋白表达阴性,有4例（6.15%）HMGA2蛋白表达阴性、PBX3蛋白表达阳性,有16例（24.62%）HMGA2蛋白、PBX3蛋白表达均阴性,HMGA2蛋白与PBX3蛋白表达呈正相关（r=0.272,P=0.028<0.05）。3.在23例有淋巴结转移的结肠癌组织中,有20例HMGA2蛋白表达阳性,阳性表达率为86.96%;在42例无淋巴结转移的结肠癌组织中,有25例HMGA2蛋白表达阳性,阳性表达率为59.52%,两者差异具有统计学意义（P=0.022<0.05）。在39例高、中分化的结肠癌组织中,有23例HMGA2蛋白表达阳性,表达率为58.97%;在26例低、未分化的结肠癌组织中,有22例HMGA2蛋白表达阳性,阳性率为84.62%,两者差异有统计学意义（P=0.028<0.05）。在36例TNM分期I期、II期的结肠癌组织中,有20例HMGA2蛋白表达阳性,阳性率为55.56%;在29例TNM分期III期、IV期的结肠癌组织中,有25例表达阳性,阳性率为86.21%,两者差异有统计学意义（P=0.008<0.05）。在患者的性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、浸润深度的分组比较中,HMGA2蛋白在结肠癌组织中的表达差异均无统计学意义（P>0.05）。4.在侵及肌层的37例结肠癌组织中,有19例PBX3蛋白表达阳性,阳性表达率为51.35%;在未侵及肌层的28例结肠癌组织中,有7例PBX3蛋白表达阳性,阳性表达率为25.00%,两者差异有统计学意义（P=0.032<0.05）。在36例TNM分期为I期、II期的结肠癌组织中,有10例PBX3蛋白表达阳性,阳性表达率为27.78%;在29例TNM分期为III期、IV期的结肠癌组织中,有16例PBX3蛋白表达阳性,阳性表达率为55.17%,两者差异有统计学意义（P=0.025<0.05）。在患者的性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、分化程度、有无淋巴结转移的分组比较中,PBX3蛋白在结肠癌组织中的表达差异均无统计学意义（P>0.05）。5.采用电话或病例查阅等方式对本研究中65例结肠癌术后患者进行随访,以手术日为随访起点,以患者失访、死亡或截止时间（2019年5月1日）为随访终点,共获得完整随访资料60例,随访率为92.31%。在60例结肠癌患者中,HMGA2蛋白表达阳性患者术后中位DFS为25.64个月,HMGA2蛋白表达阴性患者术后中位DFS为40.64个月,两组差异有统计学意义（P=0.030<0.05）。在60例结肠癌患者中,PBX3蛋白表达阳性患者术后中位DFS为23.81个月,PBX3蛋白表达阴性患者术后中位DFS为37.82个月,两组差异有统计学意义（P=0.029<0.05）。单因素COX回归分析显示,组织分化程度（HR=1.979;95%CI:1.117-3.508;P=0.019）、有无淋巴结转移（HR=7.336;95%CI:3.825-14.069;P<0.001）、TNM分期（HR=6.577;95%CI:3.484-12.417;P<0.001）、PBX3蛋白表达水平（HR=1.823;95%CI:1.055-3.150;P=0.031）及HMGA2蛋白表达水平（HR=1.945;95%CI:1.053-3.593;P=0.034）与DFS显著相关。多因素COX回归分析显示,有无淋巴结转移（HR=3.519;95%CI:1.181-10.488;P=0.024）、TNM分期（HR=3.347;95%CI:1.134-9.879;P=0.029）、PBX3蛋白表达水平（HR=2.130;95%CI:1.158-3.917;P=0.015）及HMGA2蛋白表达水平（HR=2.014;95%CI:1.006-4.032;P=0.048）是DFS的独立预测因素。6.在60例结肠癌患者中,HMGA2蛋白表达阳性患者术后中位OS为43.85个月,HMGA2蛋白表达阴性患者术后中位OS为53.58个月,两组差异无统计学意义（P=0.534>0.05）。PBX3蛋白表达阳性患者术后中位OS为39.46个月,PBX3蛋白表达阴性患者术后中位OS为53.82个月,两组差异无统计学意义（P=0.069>0.05）。单因素COX回归分析显示,有无淋巴结转移（HR=4.550;95%CI:2.444-8.473;P<0.001）及TNM分期（HR=5.772;95%CI:2.970-11.217;P<0.001）与OS显著相关。多因素COX回归分析显示,TNM分期（HR=4.967;95%CI:1.692-14.582;P=0.004）是OS的独立预测因素。结论1.结肠癌组织中HMGA2和PBX3蛋白的阳性表达率均明显较癌旁组织升高,表明两者的表达在结肠癌的发生发展中均上调。2.HMGA2与PBX3蛋白在结肠癌组织中的表达呈正相关,说明两者可能呈协同作用参与结肠癌的发生发展。3.结肠癌组织中HMGA2蛋白的表达与肿瘤组织分化程度、有无淋巴结转移及TNM分期显著相关;PBX3蛋白的表达与肿瘤的浸润深度、TNM分期显著相关,提示HMGA2与PBX3蛋白表达可能与结肠癌的转移和侵袭性相关。4.HMGA2、PBX3蛋白表达阳性的结肠癌患者术后DFS较表达阴性者短,且HMGA2、PBX3蛋白表达水平均为DFS独立预测因素,表明HMGA2蛋白及PBX3蛋白表达可能作为评估结肠癌患者预后不良的标志物。