牙鲆自然杀伤细胞增强因子(NKEF)基因的克隆及其表达分析

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自然杀伤细胞增强因子(Naturalkillerenhancingfactor,NKEF)是近年来新发现的抗氧化剂家族的重要成员,它最早从人的红细胞中得到分离纯化,能够增强自然杀伤细胞的细胞毒活性,同时在保护机体蛋白质和DNA免受氧化剂损伤等方面具有十分重要的作用。本文采用快速扩增cDNA末端(rapidamplificationofcDNAends,RACE)的方法,分离和测定了牙鲆NKEFcDNA的全长核苷酸序列,5RACE扩增分离得到了400bp左右的片段,3RACE扩增得到800bp左右的片段,并且扩增出的目的片段都非常特异,经过凝胶回收、连接、转化、双酶切检测和测序后,剪接得到牙鲆NKEF全长cDNA序列。牙鲆NKEFcDNA全长1028bp(不包含polyA),其中包括67bp的5非翻译区,597bp的开放阅读框和364bp的3非翻译区,整个开放阅读框编码198个氨基酸,NKEF蛋白分子量22kD,等电点为7.2,在第52位和173位含有两个半胱氨酸残基,和其他几种Ⅰ类抗氧化蛋白家族成员的对比可知,两个位置的半胱氨酸残基是非常保守的,并且为该族蛋白发挥其生物学功能的氨基酸区域。PCR分析表明NKEF基因在牙鲆所取组织中普遍表达,但是表达水平存在着明显的差异,并且该基因在脾脏和头肾中可以被脂多糖的诱导而表达上调,而在肝脏和小肠中则无此变化,说明了虽然牙鲆NKEF基因在牙鲆组织中均有表达,但是它们表达的模式则根据组织和刺激物的不同而不同。该基因还随着牙鲆受精卵的发育而表达水平逐渐增高。
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