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1.研究背景及目的乙型病毒性肝炎是由乙型肝炎病毒(HBV)引起的一种全球性疾病,感染者可发展为慢性乙型肝炎,其中部分患者病情可出现突然加重,迅速发展成为肝功能衰竭。慢性乙型肝炎的疾病进展过程往往较为隐匿,不易被目前的诊断方法和技术所识别,易被医患双方所忽视,待出现临床症状进行诊治时往往已进入病程中晚期,使得治疗难度增加、疗效较差、预后不良,同时使治疗成本增加,加重了患者家庭和社会的经济负担,影响社会稳定。因此找到一个既敏感又可靠同时又易于检测的临床指标来判断疾病的严重程度将是非常有价值的。巨噬细胞在机体各种病理条件,如在慢性感染、炎症、动脉粥样硬化和癌症等疾病中发挥重要作用。CD163(Cluster of Differentiation163)是高度表达的巨噬细胞膜蛋白,富含半胱氨酸结构域,属于清道夫受体。目前CD163研究最清楚的功能是作为血红蛋白-珠蛋白复合物(Hb:Hp-complex)的受体,介导巨噬细胞清除体内过多的游离血红蛋白。而可溶性CD163(soluble CD163, sCD163)则容易在血清、组织液中检测到,也能够反应单核-巨噬细胞的活化程度。此外sCD163的潜在功能十分广泛,如能进一步发掘并应用到肝脏疾病的临床研究可能会非常有意义的。目前,我国乙肝重症化的临床和病理研究资料尚不完善,sCD163在乙肝重症化过程中有何诊断价值,及sCD163与炎症的存在怎样的关系都是值得探讨的问题。在科学实验和临床检测中,经常会存在标本未能及时送检、无法低温运送,或者需要多次检测的情况。因此,标本的储存情况对我们实验结果稳定性的影响是非常值得探讨的问题。本文的研究目的是,探讨sCD163对肝脏疾病重症化的诊断价值和意义以及对不同炎症性疾病中的诊断意义。同时,探讨不同存储条件下对血清标本(sCD163)的酶联免疫吸附剂测定检测结果稳定性的影响。2.研究材料和方法2.1材料收集慢性乙型肝炎住院患者血清100例。收集肝衰竭(HBV阳性,排除HCV等病毒性肝炎)住院患者血清38例,乙肝肝硬化住院患者血清40例,慢性乙型肝炎住院患者血清38例,肝癌(HBV阳性)住院患者血清40例,乙型肝炎病毒携带者血清40例,脂肪肝(单纯性,排除HBV、HCV等病毒性肝炎)血清40例,慢性肾小球肾炎住院患者血清38例,社区获得性肺炎住院患者血清38例,急性胰腺炎住院患者血清38例,健康对照40例。2.2方法2.2.1对血清标本进行不同条件的储存所有血清标本混匀后分装,并分别于4℃和25℃保存3h、9h、24h、48h、72h和7d和反复冻融1次、2次、3次。用sCD163ELISA检测试剂盒检测上述不同储存处理后的血清。2.2.2用统计学软件SPSS17.0分析实验数据所有数据都以均数士标准差(Mean±SD)表示,当实验数据服从正态分布且方差齐性时,多组间两两比较采用单因素方差分析(ANOVA);当实验数据不服从正态分布或方差不齐性时,多组间比较采用Kruskal Wallis检验；两组间比较用Mann-Whitney U检验。相关性分析采用Spearman关联分析。以P<0.05视为差异有统计学意义。3.研究结果3.1血清标本在不同存储条件下对ELISA结果的影响3.1.1血清标本储存在25℃分别保存3h、9h、24h、48h、72h和7d各保存时间段的血清样本sCD163水平无统计学差异(P>0.05)。3.1.2血清标本存储在4℃时分别保存3h、9h、24h、48h、72h和7d各时间段保存时间的血清样本sCD163水平无统计学差异(P>0.05)3.1.3相同血清标本分别在25℃和4℃保存相同时间段后,sCD163水平无统计学差异(P>0.05)。3.1.4血清标本反复冻融1次、2次和3次血标本反复冻融3次以内,sCD163水平均无统计学差异(P>0.05)3.2各种肝脏疾病的sCD163水平比较与健康对照组的sCD163水平相比,肝衰竭、慢性乙型肝炎患者、肝癌患者、乙肝肝硬化患者、脂肪肝患者、乙肝病毒携带者较的sCD163水平明显偏高,且差异有统计学意义(P<0.05)。与肝癌患者、乙肝肝硬化患者、乙型慢性肝炎患者、脂肪肝患者、乙肝病毒携带者的sCD163水平相比肝衰竭患者血清中的sCD163水平显著升高,且差异具有统计学意义(P<0.05)。3.3sCD163在炎症性疾病中的水平比较慢性乙型肝炎、社区获得性肺炎、慢性肾小球肾炎、急性胰腺炎患者和健康对照组的sCD163水平相比较,存在统计学差异(P<0.05)。慢性乙型肝炎、社区获得性肺炎、慢性肾小球肾炎、急性胰腺炎患者的sCD163水平相比较,各类炎症之间无统计学差异(P>0.05)。3.4肝衰竭患者的sCD163水平与肝功能(ALT、AST和TBIL)、凝血功能指标(PT和INR)以及E-抗原水平的相关性分析肝衰竭患者的sCD163水平和其ALT、AST、PT、INR、TBIL和e-AG无相关性。4.研究结论4.1血清标本反复冻融3次对sCD163的ELISA检测数值无影响；血清标本储存在4℃或25℃7d内对sCD163水平的ELISA检测结果无影响。4.2sCD163是肝衰竭的敏感血清学标志蛋白,sCD163水平升高与患者的病情加重紧密相关,提示sCDl63是判断肝脏疾病重症化的重要指标。各种炎症性疾病的sCD163水平没有显著差异,提示sCD163没有明显的脏器炎症特异性。