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目的:血栓形成是复杂的病理生理过程,与血小板和内皮细胞的活化密切相关,且内皮细胞可以独立于血小板通过影响纤维蛋白产生而影响血栓形成。目前临床常用的抗血栓药物主要包括抗凝血药物和抗血小板药物,但是由于其作用单一且常伴有出血等不良反应造成临床治疗效果不佳,因此开发新型高效且安全的抗血栓药物具有重要的临床意义。二氢杨梅素（Dihydromyricetin,DHM）是一种黄酮类化合物,对于心血管系统具有广泛的保护作用,但目前DHM对血栓形成的作用及其机制尚不明确。本研究旨在阐明DHM对血小板功能、内皮细胞活化和血栓形成的影响及其潜在的作用机制。方法:采用健康成年人的洗涤血小板或富血小板血浆,在血小板聚集仪上检测DHM对不同激动剂引起的血小板聚集反应的影响;采用流式细胞仪检测DHM对血小板活化时P-selectin表达和PAC-1结合的影响,以及血小板活化过程中胞浆内Ca2+信号的影响;采用共聚焦荧光显微镜观察DHM对血小板在胶原蛋白表面扩展的影响;采用碱性磷酸酶显色法检测DHM对血小板在胶原蛋白表面黏附的影响;采用Western blot检测DHM对血小板和内皮细胞活化过程中丝裂原活化蛋白激酶（Mitogen-activated Protein Kinase,MAPK）信号通路的影响;采用Molecular docking技术研究DHM与MAPK信号通路中ERK和p38之间的相互作用;采用ELISA检测DHM对活化的内皮细胞分泌蛋白质二硫键异构酶（Protein disulfide isomerase,PDI）和血管性血友病因子（von Willerbrand factor,vWF）的影响;用FITC标记Annexin V,采用流式细胞仪检测DHM对活化的人脐静脉内皮细胞（Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVECs）磷脂酰丝氨酸（phosphatidylserine,PS）外翻的影响;采用凝血因子Xa（activated coagulation factor X,f Xa）底物显色反应检测DHM对TNF-α诱导的内皮细胞表达组织因子（tissue factor,TF）的影响;采用Fura 2-AM探针标记细胞内Ca2+,应用荧光显微镜检测DHM对HUVECs活化过程中Ca2+信号的影响;采用乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）细胞毒性检测试剂盒检测DHM对血小板和内皮细胞的毒性作用;利用FeCl3颈动脉血栓模型检测DHM对小鼠颈动脉血栓形成的影响;MSB染色法用于检测DHM对FeCl3诱导的颈动脉血栓中纤维蛋白产生的影响;采用荧光活体显微镜,应用激光诱导小鼠睾提肌微动脉血栓模型,用Alexa-649标记的anti-CD42c和Alexa-488标记的59D8单抗分别显影血小板和纤维蛋白,实时观察DHM对睾提肌微血管损伤部位血小板聚集和纤维蛋白产生的影响;小鼠尾出血实验用于评估DHM对生理性止血功能的影响;凝血酶原时间（prothrombin time,PT）和活化部分凝血活酶时间（activated partial thromboplastin time,APTT）用于检测DHM对凝血功能的影响。结果:（1）DHM浓度依赖性抑制凝血酶、胶原蛋白和ADP诱导的血小板聚集反应;（2）DHM浓度依赖性抑制凝血酶诱导的血小板上P-selectin的表达及PAC-1的结合;（3）DHM抑制血小板在胶原表面的黏附与扩展;（4）DHM浓度依赖性抑制凝血酶诱导的血小板及内皮细胞的胞内钙信号;（5）DHM显著降低血小板和内皮细胞活化过程中MAPK信号通路ERK1/2和p38的磷酸化水平;（6）DHM浓度依赖性抑制活化的内皮细胞分泌vWF和PDI及TF的表达;（7）DHM显著性抑制活化的内皮细胞膜上的磷脂酰丝氨酸（PS）外翻;（8）DHM不促进血小板和内皮细胞释放LDH;（9）DHM显著延长FeCl3诱导的小鼠颈动脉成栓时间,且血栓中纤维蛋白显著减少;（10）DHM显著抑制小鼠睾提肌微动脉血管损伤处血小板的聚集及纤维蛋白的产生;（11）DHM对PT和APTT均无影响;（12）DHM对小鼠尾出血时间无显著影响。结论:DHM对血小板和内皮细胞的活化均具有显著抑制作用,在抑制血小板活化的同时通过抑制内皮细胞活化而抑制纤维蛋白的产生而发挥抗血栓作用。DHM通过抑制血小板和内皮细胞活化过程中MAPK信号通路并减少胞内钙离子浓度,一方面抑制了血小板活化时αIIbβ3整合素的活化以及血小板的黏附、扩展、释放和聚集反应;另一方面抑制了活化的内皮细胞膜上PS的外翻,减少了促凝血分子vWF及PDI的分泌,进而减少组织因子的表达及活化,但不会诱导血小板和内皮细胞释放LDH无细胞毒性。DHM抑制血管损伤部位血小板的聚集及纤维蛋白的产生抗血栓形成,但是并不延长PT和APTT,说明DHM对纤维蛋白的影响主要与抑制内皮细胞活化有关,并且DHM在抑制血栓形成的同时并不影响生理性止血功能。因此,DHM具有成为一种新型高效且安全的抗血栓药物的潜力。